人C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒实验说明书

　　人C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒实验说明书

　　BS-0134 人C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒

　　本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附技术，通过固相抗体捕获样本中CRP，再与HRP标记的检测抗体形成复合物，最终通过TMB显色定量检测CRP含量;该方法具有高特异性，可准确区分CRP与其他炎症标志物，其检测原理基于抗原-抗体特异性结合及酶促显色反应，显色强度与样本中CRP浓度呈正相关;实验流程标准化的设计确保了结果的可重复性，适用于科研领域对CRP的精准定量分析;需注意，不同厂家试剂盒的抗体配对和检测范围可能存在差异，使用前需核对说明书确认适用性。本试剂盒包含以下核心组分：

　　预包被微孔板：96孔/48孔规格，孔内固定人CRP捕获抗体，用于特异性结合样本中的CRP;

　　标准品系列：浓度梯度为800、400、200、100、50、25 pg/ml，用于绘制标准曲线;

　　酶标抗体：HRP标记的检测抗体，与CRP结合后催化显色反应;

　　显色系统：含TMB底物(A、B液)及终止液，显色后通过450nm波长测定吸光度;

　　洗涤缓冲液：20倍浓缩液，需按1:19比例稀释后使用;

　　样本稀释液：用于高浓度样本的预处理，确保检测值在标准曲线范围内;

　　保存条件：

　　未开封试剂盒需2-8℃避光保存，有效期6个月;

　　酶标抗体、显色剂等组分开封后需分装冷冻(-20℃)，避免反复冻融;

　　注意事项：

　　不同批号试剂组分不可混用;

　　标准品及样本需恢复至室温后使用，避免结晶影响准确性;

　　样本采集与处理

　　血清/血浆：全血室温静置10-20分钟，2000-3000转/离心20分钟，收集上清液。避免溶血或脂血样本，若出现沉淀需再次离心;

　　组织匀浆：称取组织加入PBS(pH7.4)匀浆，1000×g离心10分钟取上清;

　　保存条件：短期(≤3天)2-8℃保存，长期需-70℃冻存，避免反复冻融;

　　实验步骤

　　加样：每孔加入50μl标准品或处理后的样本(高浓度样本需用稀释液预稀释);

　　孵育：37℃避光反应90分钟，使CRP与固相抗体充分结合;

　　洗涤：弃去液体，用洗涤缓冲液洗板5次，每次30秒，拍干残留液体;

　　酶标抗体：每孔加入100μl HRP标记检测抗体，37℃孵育60分钟;

　　显色：加入TMB底物避光反应15-30分钟，450nm测定OD值;

　　关键参数

　　孵育时间：各步骤需严格计时，避免过度显色影响线性范围;

　　温度控制：全程保持37℃恒温，确保反应一致性;

　　注意事项：

　　不同样本类型需匹配对应处理方法(如EDTA抗凝血浆需单独离心)

　　显色反应需避光进行，终止液加入后30分钟内完成读数。实验结束后，首先使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值)，空白孔调零后记录标准品与样本的OD值;以标准品浓度为横坐标(对数坐标)，对应OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过四参数拟合方程计算样本中CRP浓度。若样本OD值超出标准曲线范围，需用稀释液重新稀释后复测，结果乘以稀释倍数;

　　质量控制：

　　标准曲线R²应≥0.99，线性范围覆盖检测需求;

　　每批次实验需包含空白孔与质控样本，确保背景值稳定且回收率在80%-120%之间;

　　注意事项：

　　避免剧烈震荡导致微孔板气泡干扰读数;

　　显色终止后需在30分钟内完成检测，防止颜色衰减影响结果;

　　注：以上资料仅供参考，不作为实验依据，具体产品说明请咨询品牌供应商或技术老师。

　　人C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。