小鼠表面膜免疫球蛋白A(mIgA)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　小鼠表面膜免疫球蛋白A(mIgA)ELISA试剂盒使用说明书

　　一、产品概述

　　本试剂盒采用双抗体夹心法，专用于定量检测小鼠血清、血浆或细胞裂解液中的膜结合型IgA(mIgA)，其核心抗体对可特异性识别小鼠mIgA，与分泌型IgA(sIgA)无交叉反应。

　　二、实验原理

　　包被阶段：微孔板预包抗小鼠mIgA抗体，捕获样本中的mIgA。

　　检测阶段：加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗，形成“抗体-mIgA-酶标抗体”复合物。

　　显色分析：TMB底物显色后，终止液变黄，450nm波长测定吸光度(OD值)，浓度与OD值正相关。

　　三、试剂盒组成

　　组分规格保存条件

　　预包被微孔板96T/48T2-8℃(避光)

　　mIgA标准品6浓度梯度-20℃(分装)

　　HRP标记检测抗体1瓶2-8℃

　　TMB显色液1瓶2-8℃(避光)

　　四、操作流程

　　样本准备：

　　血清/血浆：避免溶血，离心后取上清。

　　细胞裂解液：含蛋白酶抑制剂，4℃保存≤1周。

　　加样与孵育：

　　标准品/样本各50μL加入微孔，37℃孵育1小时。

　　洗涤3次(每孔300μL洗涤液)。

　　显色与检测：

　　加入HRP抗体100μL，37℃孵育30分钟。

　　TMB显色15分钟，终止液50μL终止反应。

　　五、数据分析

　　标准曲线：以标准品浓度(ng/mL)为横坐标，OD值为纵坐标，拟合四参数方程。

　　样本计算：根据OD值代入方程，结果乘以稀释倍数。

　　六、注意事项

　　试剂平衡：使用前需室温平衡30分钟，避免冷凝水影响精度。

　　污染控制：不同批次试剂勿混用，枪头需无RNase/DNase。

　　异常处理：

　　高背景：检查洗涤是否充分，避免底物污染。

　　信号弱：验证酶标仪滤光片匹配性(450nm)。

　　七、性能指标

　　灵敏度：最低检测限≤10ng/mL 。

　　精密度：批内/批间变异系数均<15%。

　　回收率：85%-115%(加标实验验证) 。

　　附录：常见问题解答

　　Q1: 样本OD值超出标准曲线范围?

　　A1: 稀释样本后复测，避免高浓度钩状效应。

　　Q2: 孔间显色不均?

　　A2: 检查孵育温度是否均衡，避免叠放反应板。

　　注意：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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