人凝血因子Ⅲ(FⅢ)ELISA试剂盒实验使用说明书

    人凝血因子Ⅲ(FⅢ)ELISA试剂盒实验使用说明书
    BS-0927人凝血因子Ⅲ(FⅢ)ELISA试剂盒
    一、实验原理
    本试剂盒采用‌双抗体夹心法‌检测人血清或血浆中的凝血因子Ⅲ（FⅢ）浓度。
    包被抗体‌：微孔板孔内预包被抗人FⅢ单克隆抗体，捕获样本中的FⅢ。
    检测抗体‌：加入HRP标记的抗人FⅢ多克隆抗体，与捕获的FⅢ形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
    显色反应‌：加入TMB底物液，HRP催化反应生成蓝色产物，终止液（2M溶液）终止后变黄，450nm波长测定吸光度（OD值），浓度与OD值正相关。
    二、试剂盒组成
    组分规格/数量保存条件
    预包被微孔板96孔（可拆）2-8℃密封保存
    FⅢ标准品冻干粉，2瓶-20℃长期保存
    标准品稀释液1.5mL×1瓶2-8℃
    HRP标记检测抗体6mL×1瓶2-8℃避光
    TMB底物液A液+B液各3mL2-8℃避光
    20×洗涤缓冲液20mL×1瓶室温
    终止液（2M溶液）6mL×1瓶室温
    封板膜2张室温
    注‌：所有试剂使用前需平衡至室温（20-25℃），避免反复冻融。
    三、样本处理
    血清‌：
    血液室温静置10-20分钟，1000×g离心10分钟分离血清。
    避免溶血，分装后-20℃保存，避免反复冻融。
    血浆‌：
    使用EDTA或肝素抗凝，离心后取上清。
    保存同血清，但需注意抗凝剂可能干扰检测（建议预实验验证）。
    四、实验步骤
    加样‌：
    标准品梯度稀释（如80、40、20、10、5、2.5U/L），每孔加100μL。
    样本孔加100μL待测样本，空白孔加稀释液。
    37℃孵育90分钟，洗板5次（每次拍干）。
    检测‌：
    每孔加100μLHRP标记抗体，37℃孵育60分钟，洗板。
    加100μLTMB底物，避光显色15分钟，立即加50μL终止液。
    读数‌：
    450nm波长测OD值，空白孔调零。
    绘制标准曲线（OD值vs.浓度），样本浓度通过曲线计算。
    五、注意事项
    试剂保存‌：未开封试剂盒2-8℃保存6个月，开封后组分需密封防潮。
    操作规范‌：
    加样时间控制在5分钟内，避免气泡。
    洗涤需彻底，拍干孔内液体，防止交叉污染。
    安全防护‌：
    终止液具腐蚀性，操作时戴手套，溅到皮肤立即冲洗。
    底物液避光保存，显色后立即读数。
    六、常见问题处理
    问题现象可能原因解决方案
    高背景/假阳性洗板不充分、试剂污染增加洗涤次数，更换新试剂
    无显色信号酶失活、漏加底物检查试剂有效期，复核操作步骤
    样本值异常溶血、反复冻融重新采集样本，避免冻融
    七、质控要求
    标准曲线‌：R²≥0.99，线性范围覆盖样本预期浓度。
    回收率‌：80%-120%（通过加标实验验证）。
    精密度‌：板内CV<10%，板间CV<15%。
    提示‌：实验前建议阅读完整说明书，并预实验验证样本稀释倍数。
    人凝血因子Ⅲ(FⅢ)ELISA试剂盒实验使用说明书本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴！