大鼠核因子κB抑制物激酶(IKK)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　大鼠核因子κB抑制物激酶(IKK)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-8621大鼠核因子κB抑制物激酶(IKK)ELISA试剂盒

　　一、试剂盒核心参数

　　检测范围：0.313-20 ng/mL(血清/血浆样本需稀释至线性区间)

　　灵敏度：最低检出限0.188 ng/mL(信噪比≥3)

　　特异性：与大鼠IKKβ高度结合，与IKKα等类似物交叉反应率<5%

　　样本类型：血清、血浆、细胞裂解液或组织匀浆(需离心去除颗粒物)

　　二、实验操作流程

　　1. 试剂准备

　　将试剂盒从4℃冰箱取出，平衡至室温(20-25℃)

　　未使用板条需立即放回含干燥剂的铝箔袋密封保存

　　2. 加样与孵育

　　标准品梯度稀释：用PBS按1:2比例稀释，制备7个浓度梯度(最高浓度20 ng/mL)

　　样本处理：血清/血浆样本建议稀释5-10倍，避免基质效应干扰

　　孵育条件：每孔加100μL标准品或样本，37℃避光孵育90分钟

　　3. 洗板与抗体反应

　　洗涤程序：洗板液洗涤5次，每次30秒，拍干后立即进行下一步

　　生物素化抗体：每孔加100μL工作液(按说明书1:100稀释)，37℃孵育60分钟

　　酶结合物：孵育30分钟后终止反应，避光保存待测

　　4. 显色与终止

　　每孔加100μL TMB底物液，室温避光孵育15-20分钟

　　加入50μL终止液(2M H₂SO₄)，立即测定450nm吸光度

　　三、关键注意事项

　　温度控制：全程保持37℃恒温，避免温度波动影响结合效率

　　移液精度：使用校准后的移液器，加样误差需<5%

　　交叉污染：更换枪头避免孔间污染，尤其高浓度样本

　　数据有效性：标准曲线R²应≥0.98，样本OD值需落在曲线中间段

　　四、结果计算

　　使用四参数逻辑拟合(4PL)或线性回归计算样本浓度

　　重复样本CV值应<15%(建议设置双复孔)

　　注：以上资料仅供参考，具体产品信息请咨询技术老师或品牌供应商。

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