鸡α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　鸡α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-4309 鸡α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)ELISA试剂盒

　　鸡α-葡萄糖苷酶ELISA试剂盒使用说明书

　　一、试剂盒组成

　　组分 名称 规格 保存条件 备注

　　预包被微孔板96孔/板×14℃避光含抗鸡α-GC单抗

　　标准品(冻干)2瓶-20℃临用前用标准品稀释液复溶

　　酶标二抗(HRP标记)120μL/瓶-20℃避光1:100稀释使用

　　TMB底物溶液10mL4℃避光含H₂O₂显色系统

　　终止液(2M H₂SO₄)10mL室温腐蚀性液体，需谨慎操作

　　洗涤缓冲液(20×浓缩)20mL室温需1:25稀释

　　二、自备器材

　　酶标仪(450nm波长)

　　恒温孵育箱(37±0.5℃)

　　微量移液器(20-200μL范围)

　　离心机(≥12,000rpm)

　　去离子水及EP管

　　三、实验步骤

　　1. 样本制备

　　血清样本：采集后4℃静置30min，3000rpm离心10min，取上清分装冻存(-80℃≤3个月)。

　　组织匀浆：按1:5(w/v)加入PBS，冰浴研磨后离心取上清^^2^^。

　　2. 标准曲线制备

　　将冻干标准品用标准品稀释液复溶，梯度稀释为0、2.5、5、10、20、40 ng/mL六个浓度点。

　　3. 加样与孵育

　　步骤操作内容温度/时间

　　1每孔加标准品/样本100μL37℃ 90min

　　2洗涤3次，拍干室温

　　3加酶标二抗工作液100μL/孔37℃ 60min

　　4洗涤5次室温

　　5加TMB底物90μL/孔避光显色室温15min

　　6加终止液50μL/孔终止反应立即读数

　　4. 数据计算

　　酶标仪450nm测定OD值，减去空白孔背景值。

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制四参数拟合曲线。

　　四、注意事项

　　温度控制：孵育全程需保持37±0.5℃，温度波动会导致CV值升高。

　　洗涤规范：每次洗涤需静置30秒，拍干时避免直接接触孔底。

　　安全防护：终止液含强酸，操作时需戴护目镜和手套。

　　有效期：未开封试剂盒2-8℃保存6个月，开封后微孔板需密封避光。

　　五、性能参数

　　灵敏度：0.5 ng/mL(检测下限)

　　回收率：85%-110%(加标实验验证)

　　批间差：CV≤12%(n=8)

　　线性范围：2.5-40 ng/mL(R²≥0.99)

　　六、常见问题解决

　　问题现象可能原因解决方案

　　标准曲线拟合差复溶不充分涡旋震荡5min后静置10min

　　背景值过高洗涤不彻底增加洗涤次数至8次

　　显色不均匀底物溶液变质更换新批次试

　　注：仅供科研使用，以上资料供参考，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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