大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒实验使用说明书

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　　BS-3649 大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　采用双抗体夹心法检测样本中HMGB-1含量。通过包被抗体捕获目标蛋白后，依次加入检测抗体和酶标记物形成复合物，最终通过TMB显色反应测定浓度‌。

　　二、样本处理要求

　　血清‌：室温凝固10-20分钟后2000-3000rpm离心20分钟‌

　　血浆‌：需使用EDTA/柠檬酸钠抗凝，离心后取上清‌

　　组织匀浆‌：按重量加入PBS匀浆后离心‌

　　保存条件‌：建议分装冻存于-20℃，避免反复冻融‌

　　三、试剂盒组成

　　包含包被板、标准品(浓度通常为0-160μg/L)、生物素标记抗体、链霉亲和素-HRP、显色液(TMB)及终止液等‌。不同规格试剂盒组分体积存在差异(如48孔/96孔配置)‌。

　　四、操作步骤

　　标准品稀释‌：按说明书梯度稀释‌

　　加样顺序‌：依次加入标准品/样本→检测抗体→酶结合物‌

　　温育条件‌：37℃反应，具体时间参照不同试剂盒要求(通常30-60分钟)‌

　　显色终止‌：加入TMB显色15分钟后加终止液‌

　　五、注意事项

　　浓缩洗涤液需1:20稀释，使用前需溶解结晶‌

　　避免底物接触金属器械，显色后需立即检测OD值‌

　　计算结果时需注意样本稀释倍数(通常需×5)‌

　　六、结果计算

　　在450nm波长下测定OD值，通过标准曲线计算浓度‌。建议使用专业酶标仪分析‌。

　　注：不同品牌试剂盒可能存在参数差异，请以实际说明书为准‌。