植物脂氧合酶(LOX)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　以下是植物脂氧合酶(LOX)ELISA试剂盒的实验使用说明，综合了相关检测原理、操作步骤及注意事项：

　　BS-8002   植物脂氧合酶(LOX)ELISA试剂盒

　　检测原理‌

　　采用双抗体夹心法：

　　微孔板预包被LOX抗体形成固相抗体

　　依次加入样本、HRP标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物

　　TMB显色后，颜色深浅与LOX活性呈正相关，450nm测OD值计算浓度

　　试剂盒组成‌

　　预包被微孔板

　　标准品(通常含S0-S5浓度梯度)

　　HRP标记抗体、TMB显色液、终止液

　　浓缩洗涤液(需1:20稀释)

　　样本处理‌

　　组织样本‌：按1:5~10(质量:体积)加入提取液，冰浴匀浆后4℃ 15000g离心20min取上清

　　保存要求‌：分装后-20℃冻存，避免反复冻融;NaN3会抑制HRP活性，需避免使用

　　操作步骤‌

　　标准品稀释‌：按说明书梯度稀释(如0-320 U/L)

　　加样‌：

　　分别加入标准品、样本各50μL至对应孔

　　立即加入50μL HRP标记抗体，37℃孵育60min

　　洗涤‌：手工洗板需加满洗涤液，静置1min后甩干，重复5次

　　显色‌：

　　每孔加TMB底物100μL，37℃避光显色15-30min

　　加终止液50μL，颜色由蓝变黄

　　检测‌：450nm测OD值，用标准曲线计算样本浓度

　　注意事项‌

　　试剂使用前需室温平衡20分钟，结晶需水浴溶解

　　显色时间需严格控制，避免过度反应

　　空白孔(S0)作为阴性对照，样本OD值需在标准曲线范围内

　　结果计算‌

　　样本浓度=标准曲线对应浓度×稀释倍数(若样本预先稀释需乘以相应系数)

　　如需具体试剂盒的差异步骤，请参考对应产品的说明书。

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