犬维生素E(VE)ELISA试剂盒操作步骤

　　犬维生素E(VE)elisa试剂盒操作步骤

　　标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品支，依次进行稀释数倍。

　　加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　配液：将30倍(48T 的20 倍)浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

　　洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。

　　加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　温育：操作同3。

　　洗涤：操作同5。

　　显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

　　终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　犬维生素E(VE)ELISA试剂盒组织结构：

　　1、血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心35分钟将血红细胞迅速小心地分离。

　　2、血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心60分钟去除颗粒。

　　3、细胞上清液：1000×g离心32分钟去除颗粒和聚合物。

　　4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心33分钟，取上清液。

　　5、保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

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