试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断！

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　　大鼠白细胞介素6(IL-6)ELISA检测试剂盒使用说明书

　　检测原理：

　　试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验 ( ELISA ) 。 往预先包被 白细胞介素 6 ( IL-6 ) 抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品 、 HRP 标记的检测抗体 ， 经过温育并彻底洗涤 。用底物 TMB 显色 ，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色 ， 并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的 白细胞介素 6 ( IL-6 ) 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值 ) ，计算样品浓度。

　　样品收集、处理及保存方法：

　　1. 血清 ： 使用不含热原和内毒素的试管 ， 操作过程中避免任何细胞刺激 ， 收集血液后 ， 3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2. 血浆 ： EDTA 、 柠檬酸盐或肝素抗凝 。 3000 转离心 30 分钟取上清 。

　　3. 细胞上清液： 3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

　　4. 组织匀浆 ： 将组织加入适量生理盐水捣碎 。 3000 转离心 10 分钟取上清。

　　5. 保存 ： 如果样本收集后不及时检测 ， 请按一次用量分装 ， 冻存于-20 ℃ ，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻 。

　　自备物品：

　　1. 酶标仪( 450nm )

　　2. 高精度加样器及枪头 ： 0.5-10uL 、 2-20uL 、 20-200uL 、 200-1000uL

　　3. 37 ℃ 恒温箱

　　操作注意事项：

　　1. 试剂盒保存在 2-8 ℃ ，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

　　2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中 ， 密封 ( 低温干燥 ) 保存 。

　　3. 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，*终结果乘以 5 才是样本实际浓度 。

　　4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

　　5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

　　试剂盒组成：

　　名称 96孔配置 48孔配置 备注

　　微孔酶标板 12 孔 × 8 条 12 孔 × 4 条 无

　　标准品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 无

　　样本稀释液 6 mL 3 mL 无

　　检测抗体 -HRP 10mL 5mL 无

　　20 × 洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释

　　底物 A 6mL 3mL 无

　　底物 B 6mL 3mL 无

　　终止液 6mL 3mL 无

　　封板膜 2 张 2 张 无

　　说明书 1 份 1 份 无

　　自封袋 1 个 1 个 无

　　注：标准品( S0-S5 )浓度 依次 为： 0 、 10 、 20 、 40 、 80 、 160 p g/mL

　　试剂的准备：

　　20 × 洗涤缓冲液的稀释 ： 蒸馏水按 1 ： 20 稀释 ， 即 1 份的 20 × 洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。

　　洗板方法：

　　1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。

　　2. 自动洗板机：每孔注入洗液 350 μ L ，浸泡 1min ，洗板 5 次。

　　操作步骤：

　　1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条 ， 剩余板条用自封袋密封放回 4 ℃ 。

　　2. 设置标准品孔和样本孔 ， 标准品孔各加不同浓度的标准 品 50 μ L ;

　　3. 样本孔先加 待测样本 10 μ L ，再 加样本稀释液 4 0 μ L ; 空白孔不加。

　　4. 除空白孔外， 标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶( HRP )标记的检测抗体 100 μ L ，用封板膜封住反应孔， 37 ℃ 水浴锅或恒温箱温育 60min 。

　　5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min ，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次(也可用洗板机洗板 ) 。

　　6. 每孔加入底物 A 、 B 各 50 μ L ， 37 ℃ 避光孵育 15min 。

　　7. 每孔加入终止液 50 μ L ， 15min 内 ， 在 450nm 波长处测定各孔 的OD 值。

　　结果判断：

　　绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对 应OD 值作纵坐标 ， 绘制出标准品线性回归曲线 ， 按曲线方程计算各样本浓度值。

　　免责声明：

　　1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或 人 体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

　　2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。