猪γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒说明书

　　猪γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒说明书

　　l 本试剂盒用于体外定量检测猪血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中γ干扰素(IFN-γ)的含量。

　　l 有效期：6个月

　　l 保存条件：2-8℃

　　使用目的

　　本试剂盒用于体外定量检测猪血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中γ干扰素(IFN-γ)的含量。

　　实验原理

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猪γ干扰素(IFN-γ)水平。用纯化的猪γ干扰素(IFN-γ)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入γ干扰素(IFN-γ)，再与HRP标记的γ干扰素(IFN-γ)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素(IFN-γ)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中猪γ干扰素(IFN-γ)浓度。

　　猪γ干扰素试剂盒注意事项

　　l 本试剂盒仅用于科研，不得用于医学诊断。

　　l 使用试剂盒前，请仔细阅读说明书，以试剂盒内的说明书为准，请务必理解说明书内容。

　　l 酶标包被板属于可拆型，开封后如未用完，板条应装入铝箔袋密封并2-8°C保存。

　　l 加样样本和试剂应尽快完成。

　　l 避免实验过程中酶标板干燥;清洗后尽快加试剂。

　　l 实验开始，所有试剂应平衡到室温 (21-26°C) 后方可进行。温度会影响吸光度值，但不影响样本值。

　　l 切忌用口加样，以免试剂和样本粘到皮肤和粘膜上。

　　l 不要在处理样本或试剂的区域抽烟、吃东西、喝酒或化妆。

　　l 操作时带一次性手套，微生物的污染会影响实验结果的正确性。

　　l 过期的试剂盒切勿再使用。

　　l TMB 底物对皮肤有刺激性，不慎入眼，立即用大量水冲洗，皮肤上不慎接触到也应立即用肥皂，并用大量的水冲洗。试验中被污染的物品在下次使用前应尽快清洗。

　　猪γ干扰素试剂盒组成

　　1.说明书 1份

　　2.封板膜 2张

　　3.酶标包被板 12孔×8条

　　4.标准 1600 pg/ml 0.6ml×1 瓶

　　5.标准品稀释液 2ml×1 瓶

　　6.生物素标记的抗IFN-γ抗体 1.5ml×1瓶

　　7.显色剂A液 6ml×1瓶

　　8.显色剂B液 6ml×1瓶

　　9.终止液 6ml×1瓶

　　10.酶标试剂 6ml×1瓶

　　11. 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶

　　需要而未提供的试剂和器材

　　l 吸光度值在450nm波长下检测的酶标仪。

　　l 1-2ml的加样器。

　　l 100 ml和1L的量筒。

　　l 吸水纸。

　　l 37°C 恒温箱。

　　l 蒸馏水或去离子水。

　　l 数据分析和绘图软件，图纸。

　　l 标准和样品稀释的试管。

　　储存条件

　　u 有效期内的试剂如开封后未用完，请2-8°C 保存。

　　u 过期的试剂请不要用，打开后的试剂2-8°C 保存。

　　u 酶标包被板必须2-8°C 保存，如有未用完的酶标包被板，打开的铝箔袋须密封并2-8°C 保存。

　　u 开封后的试剂盒2-8°C只能保存8周。

　　试剂准备

　　试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

　　样本处理及要求

　　1. 血清-用采血管收集血液，室温血液自然凝固30分钟，1000 xg离心15分钟左右，收集上清，尽早进行实验，或者分装后-20°C 或 -80°C 保存。

　　2. 血浆-收集好的血浆根据要求选择EDTA或者肝素作为抗凝剂，2-8°C 1000 xg离心15分钟左右，30分钟内收集好，-20°C 或 -80°C 保存，避免反复冻融。

　　3. 细胞上清及相关液体-收集好的样本离心后应尽快实验，或者分装后-20°C 或 -80°C 保存，避免反复冻融。

　　猪γ干扰素试剂盒操作步骤

　　u 注意事项

　　l 所有试剂和样本使用前必须在室温下平衡，混匀试剂时不应起泡沫。

　　l 一旦实验开始，各操作步骤都应尽快完成。

　　l 避免重复使用手中的吸头和试管，以免交叉污染。

　　l 一般情况，酶的反应与时间和温度成正比。

　　操作步骤

　　猪γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒说明书

　　1. 标准品的稀释：准备小试管6只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul加入第二支试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul加入第三只试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul加入第四只试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀;然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0号标准品。稀释后各管浓度分别是：800pg/ml,400 pg/ml,200 pg/ml,100pg/ml,50pg/ml ,0 pg/ml。

　　在酶标包被板上设标准品孔，依次加入不同浓度的标准品50ul(建议每个浓度做2个平行孔)。

　　2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品、酶标试剂及生物素标记的抗IFN-γ抗体，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl，然后再加生物素标记的抗IFN-γ抗体10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

　　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7. 温育：操作同3。

　　8. 洗涤：操作同5。

　　9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行

　　猪γ干扰素试剂盒实验结果计算

　　以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，即为样品的实际浓度。

　　猪γ干扰素试剂盒本生生物公司供应：ELISA试剂盒,动物血清,荧光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量离心管,进口冻存管,细胞培养皿,培养板,培养瓶,进口吸头,仪器及手套,色谱耗材,针头过滤器等。