本生快讯：如何选择细胞培养用液和使用注意事项
 

　　细胞培养当中，选择好合适的培养用液和正确使用培养用液都是细胞培养得好的关键，本期BUNSEN本生小编经验分享给大家，希望能给大家的细胞培养带来帮助。

　　1、如何正确选择培养基种类?

　　引用几款比较经典的培养基举例：

　　2、如何选用特殊细胞系培养基?

　　培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞，很可能在 DMEM 或 M199 中同样很容易生长。总之，首先选 MEM 做粘附细胞培养，RPMI-1640 做悬浮细胞培养是一个好的开始。

　　3、什么培养基中可以省去加酚红?

　　酚红在培养基中被用来作为 PH 值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用(特别是雌激素)。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。

　　4、细胞培养基的配制和储存应该注意什么?

　　细胞培养基配好后，要先抽取少许放入培养瓶内在37℃培养箱内放置24~48h，已检测培养液是否有污染，然后方可用于实验。配置培养基所需的血清要合格并且保持稳定。一个批号试用效果良好后，就可一次购入较多同一批号的血清，这样实验条件稳定，配液时调整pH值较容易。每次配液量以使用两周左右的量为宜，一次配液不要太多，一是短期内用不完造成营养成分损失需要补充，二是量大易造成污染。

　　5、为何培养基保存于 4 ℃ 冰箱中，颜色会偏紫色?

　　培养基保存于 4 ℃ 冰箱中，培养基内的 CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性，而培养基中的酸碱指示剂 (通常为 phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏紫色。培养基偏碱的结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤 CO2，以调整 pH 值。

　　6、什么情况下用到无血清培养基?

　　对于应用培养细胞进行分离制备细胞生长因子、单克隆抗体等应该选择无血清培养基。

　　7、如何选择正确的血清种类?

　　8、可否使用与原先培养条件不同的血清种类?

　　不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

　　9、血清灭活是否必须?

　　一般情况下不建议。热灭活是以 56℃，30 分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有：溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。

　　实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或*没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多， 这些沉淀物在倒立显微镜下观察，像是 "小黑点"，常常会让研究者 误以为是血清遭受污染，而把血清放在 37C 环境中，又会使此沉淀 物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此除了做免疫学相关实验和培养一些特定细胞，如平滑肌细胞、胚胎干细胞等，不需要做热灭活处理。

　　10、培养基中是否添加抗生素?

　　除特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。

　　11、何时更换培养基?

　　视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。

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