本生详述：胸腺嘧啶核苷的原理及配置方法

　　本生详述：胸腺嘧啶核苷的原理及配置方法
 

　　应用：

　　胸腺嘧啶核苷为生化试剂，制备生物培养基，例如HAT选择性培养基的制备。

　　原理：

　　在单抗制备中，由于需要进行选择性杀死非目标细胞，所以使用添加HAT的选择性培养基，其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径(“D途径”)，即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基蝶呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。另一条途径是应急途径或补救途径(“S途径”)，它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基蝶呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型(HGPRT)细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基蝶呤阻断，所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡。只有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HAT培养液中选择性存活下来，并不断增殖。通常HAT中，H(次黄嘌呤)的浓度为1×10-4M，A(氨基蝶呤)为4×10-7M，T(胸腺嘧啶)为1.6×10-5M，在HT培养基中，只需要不加氨基蝶呤，其它都同HAT。

　　HAT培养基的配制：

　　100×A(氨基喋呤) 贮存液：称取1.76mg氨基喋呤溶于90ml超纯水中，滴加1mol/L的NaOH 0.5ml助溶，待完全溶解后，加1mol/L HCL 0.5ml 中和，再补加超纯水到100ml。0.22um膜过滤除菌，小量分装，-20℃保存。

　　100×HT贮存液：称取136.1mg次黄嘌呤和38.8mg胸腺嘧啶核苷，加超纯水到100ml，置45-50℃水浴中使完全溶解，0.22μm膜过滤除菌，小量分装，-20℃保存，临用前37℃水浴中溶解。

　　HT培养基：82ml基础培养基中加入1ml HT(100×)，1ml SP(100×)，15ml灭能的犊牛血清。

　　HAT培养基：99ml HT培养基加入1ml A(100×)。

　　胸腺嘧啶核苷本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。