对于细胞冻存的注意事项妮妮了解多少？

　　对于细胞冻存的注意事项妮妮了解多少？
 

　　想要冻存好细胞，还是需要注意不少细节，许多同学细胞冻存后复苏效果差，以下是一些细胞冻存比较关键的细节，BUNSEN本生小编详解如下：

　　01

　　冻存液的配置方法：冻存液：10%DMSO + 90%FBS。

　　但是这个比例各个实验室不一样，10%DMSO一般不怎么变，剩下90%可以根据自己情况调整。我用过10%DMSO + 20%FBS + 70%培养基，也用过10% DMSO + 90%FBS(现在在用)，都可以，细胞复苏成活率都90%以上。

　　02

　　先配好冻存液，放在4度，等临用前再加。

　　DMSO在常温下对细胞损伤较大，很多人因此冻细胞时冻一批死一批。

　　03

　　最好用程序降温盒，每分钟降一度，效果比按温度梯度放不同冰箱来得好。

　　把加好的含有细胞的冻存液放到程序降温盒里，再放到-80度冰箱，过夜，第2天取出再放至液氮中。

　　04

　　冻存时细胞的密度如何更简单的估算出来?我用两种规格的培养瓶，T25和T75，如果细胞都长满的情况下，可以分别冻存多少管呢?(1.8ml的冻存管)。

　　这个问题最好细胞计数后再冻存，经验这时候不靠谱，一般1百万/管，1ml/管。1百万就是1x106 cells/mL。

　　有的细胞，比如MDCK，可以一瓶T25长满90%时冻存1~2管，T75则可以冻存4~6管。

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