技术资料：免疫组化双染实验操作步骤

　　技术资料：免疫组化双染实验操作步骤
 

　　标签：溶液 血清 一抗 二抗 BUNSEN本生 试剂

　　第一抗体的染色：

　　1、 将切片浸在3%H2O2甲醇溶液(新鲜配制)中10分钟，PBS冲洗2分钟×3次

　　2、 加100ul(2滴)血清封闭溶液(试剂1)到切片上，室温孵育10分钟，倒掉(不能冲洗)

　　3、 加入一抗(按照说明推荐浓度和孵育条件)

　　4、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)，冲洗2分钟×3次

　　5、 加入100ul(2滴)生物素化的二抗(试剂2)，室温孵育10分钟

　　6、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)冲洗2分钟×3次

　　7、 加入100ul(2滴)链霉亲和素-AP(试剂3)的二抗，室温孵育10分钟

　　8、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)冲洗2分钟×3次

　　9、 准备底物溶液：将1滴试剂4A和4B加入到1ml去离子水中，充分混匀;再加入1滴试剂4C，充分混匀

　　10、 加100ul(2滴)配好的AP底物溶液，室温孵育(镜下检测孵育时间)

　　11、 使用含有0.05%吐温20的去离子水冲洗终止反应

　　第二抗体的染色：

　　12、 加100ul(2滴)双染增强剂(试剂7)，孵育

　　13、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)，冲洗2分钟×3次

　　14、 加100ul(2滴)血清封闭溶液(试剂1)到切片上，室温孵育10分钟，倒掉(不能冲洗)

　　15、 加入稀释好的一抗(按照说明推荐浓度和孵育条件)

　　16、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)，冲洗2分钟×3次

　　17、 加入100ul(2滴)生物素化的二抗(试剂2)，室温孵育10分钟

　　18、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)冲洗2分钟×3次

　　19、 加入100ul(2滴)链霉亲和素-HRP(试剂5)的二抗，室温孵育10分钟

　　20、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)冲洗2分钟×3次

　　21、 准备底物溶液：将1滴试剂6A和6B加入到1ml去离子水中，充分混匀;再加入1滴试剂6C，充分混匀：

　　22、 加100ul(2滴)配好的HRP底物溶液，室温孵育(镜下检测孵育时间)

　　23、 使用含有0.05%吐温20的去离子水冲洗终止反应

　　24、 使用复染试剂染色(根据需要选择)

　　25、 封片剂(试剂8)封片，显微镜观察结果 免疫学免疫组织化学

　　第二抗体的染色：

　　12、 加100ul(2滴)双染增强剂(试剂7)，孵育

　　13、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)，冲洗2分钟×3次

　　14、 加100ul(2滴)血清封闭溶液(试剂1)到切片上，室温孵育10分钟，倒掉(不能冲洗)

　　15、 加入稀释好的一抗(按照说明推荐浓度和孵育条件)

　　16、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)，冲洗2分钟×3次

　　17、 加入100ul(2滴)生物素化的二抗(试剂2)，室温孵育10分钟

　　18、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)冲洗2分钟×3次

　　19、 加入100ul(2滴)链霉亲和素-HRP(试剂5)的二抗，室温孵育10分钟

　　20、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPBS)冲洗2分钟×3次

　　21、 准备底物溶液：将1滴试剂6A和6B加入到1ml去离子水中，充分混匀;再加入1滴试剂6C，充分混匀：

　　22、 加100ul(2滴)配好的HRP底物溶液，室温孵育(镜下检测孵育时间)

　　23、 使用含有0.05%吐温20的去离子水冲洗终止反应

　　24、 使用复染试剂染色(根据需要选择)

　　25、 封片剂(试剂8)封片，显微镜观察结果 免疫学免疫组织化学

　　免疫组化双染实验 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。