本生分享：琼脂糖凝胶电泳的制备过程

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　　本生分享：琼脂糖凝胶电泳的制备过程

　　制备琼脂凝胶：

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　　第一步：用称量纸片(抽屉里)电子天平取0.3g的琼脂粉(以30毫升体系为标准)

　　第二步：配30ML的1*10的TBST缓冲液与100ml的三角烧瓶里;

　　第三步：dao入琼脂粉摇匀，并转到微波炉中加热(一般是50S,加锡箔纸封盖)溶解完全

　　第四步：用手套取出到凉水稍稍晾凉至温热后(约60℃)，加入核酸酶(Eb替代物)2ul;要边加边摇匀，使之充分摇匀;

　　第五步：取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.

　　开始跑胶

　　第一步：胶凝后取胶放到电泳槽中，倒入电泳液至浸过凝胶

　　第二步：从冰箱中取出MARK和loading buffer，加入6ULloading buffer到样品中混匀;然后用加样枪分别加到凝胶的大孔中(要缓慢加，不要穿破凝胶，最后枪不要打尽以至于有空气使样品吹打出来);MARK加到小孔中的任一孔(记住位置)

　　第三步：盖上电泳槽，加样后的凝胶板立即通电进行电泳，电压60-100V，样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动，电压升高，琼脂糖凝胶的有效分离范围降低，当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时，停止电泳。

　　第四步：使用凝胶成像仪拍照，观察条带(mark或样品是否有条带显示)

　　观察方法：电泳时间依据实验的具体要求而定，在电泳中途可以使用紫外灯直接观察，也可以根据指示剂确定条带的迁移位置，各条区分开后电泳结束，取出凝胶直接检测拍照。

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