知识大全：细胞常见问题解答

　　01、细胞培养过程中常用的基础培养基有哪些?

　　答：MEM、DMEM、F12K、DMEM/F12、α-MEM、PRMI1640、L-15、McCoy’s5A等。

　　02、储存在冰箱中的培养基，在放置几天后颜色变紫是什么原因?

　　答：培养基保存在4℃条件下，培养基内的CO2会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性，而培养基中酸碱指示剂(通常为酚红)的颜色也会随着碱性增加而偏紫。培养基偏碱性将会造成细胞生长停滞或死亡。可以在使用前旋松瓶盖(用于培养箱与培养基瓶中气体交换)，在CO2培养箱中孵育培养基10-15分钟，来校正溶液PH值。

　　03、血清中可能出现的沉淀物是什么?

　　1)纤维蛋白。它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到1-2mm，可以用肉眼观察到。

　　2)磷酸钙。它也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此常被误认为是微生物污染。

　　3)胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。它们也是血清中出现沉淀物的常见原因。

　　04、什么是热灭活，有必要作热灭活吗?

　　答：热灭活是指以56℃，30分钟水浴处理已经解冻的血清，使血清中的补体灭活。以往公认的操作中，培养的血清通常是经过热灭活的，但是并没有确凿的证据说明这样做是有益的，虽然灭活有可能降低支原体的滴度，但灭活能够消除支原体的论点还不能算是成立。另外，经过灭活的血清，颗粒状沉淀物会显著增加。

　　建议：若非必须，不要对血清进行热灭活。不断可以节约时间，而且确保血清的质量。

　　05、细胞生长缓慢是什么原因?

　　1)生长培养基使用不当;建议按照生产商的建议，使用与细胞相对应的培养基。

　　2)生长培养基中血清质量差;建议更换其他品牌或者其他批次的血清。

　　3)传代操作不当;按照生产商的建议消化时间及传代比例进行操作。

　　4)换液过于频繁;降低换液频率，参考生产商推荐的换液频率。

　　5)细胞生长超过汇合状态;哺乳动物细胞传代应在细胞处于对数其、未达到汇合状态时进行，建议密度80%传代。

　　6)细胞状态不佳，传代次数过多;使用传代次数较少的健康细胞。

　　7)支原体污染;弃掉原有细胞及培养基，重新复苏代数比较低的细胞。

　　06、细胞复苏后存活率低是什么原因?

　　1)细胞冻存不当;首先要确保冻存细胞前细胞的状态良好，严格按照生产商推荐的操作程序冻存细胞，冻存过程中液氮灌中液氮充足，不在冰箱里面长期存放细胞。

　　2)复苏方法不当;严格按照生产商推荐的操作程序复苏细胞，确保冷冻细胞解冻迅速。

　　3)处理细胞时动作不够轻柔;冻存和复苏过程对大多数细胞会造成不利影响，应进行低速离心。

　　4)冻存液中保护剂存储不当;没有避光细胞冻存保护剂会转变为对细胞有毒性的物质，应及时更换。

　　07、培养基PH值变化迅速是什么原因?

　　1)培养箱CO2分压设置错误，根据培养基中的NaHCO3的浓度增大或降低培养箱CO2的分压，NaHCO3浓度为2.0-3.7g/l时，应相应地使用5%-10%的CO2分压。

　　2)细胞培养瓶瓶盖过紧将瓶盖旋松1/4圈。

　　3)碳酸氢钠缓冲系统缓冲能力不足，加入HEPES缓冲液，使其终浓度为10-25mM。

　　4)细菌、酵母或者真菌污染，将细胞和培养基灭菌处理后丢弃。

　　08、微生物污染有那些独有的特点?

　　1)PH突然改变，细菌污染的大多数情况是PH降低，酵母污染时PH很少改变，只有在污染严重时PH才会改变。真菌污染有时会出现PH上升。

　　2)培养基出现云雾状，有时表面出现片层或者泡沫状，或在生长表面出现点状物，当移动培养瓶时它们会消失。

　　3)细菌污染时，在低倍镜下(约100倍)可见细胞之间的空隙处有细沙状的颗粒物。酵母污染则显示有分散的圆形或卵形的颗粒，并可能出芽长出更小的颗粒，真菌污染会产生细的纤维状菌丝体或有时产生密集的孢子，随着毒性加重，细胞坏死越来越明显。

　　4)在高倍镜下(约400倍)，有可能分辨出细菌个体，并可区分出杆菌或球菌。

　　细胞 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。本生吸头盒