本生快讯| ELISA实验标本应如何采集、处理及保存?

　　ELISA作为免疫学中最经典的实验，能及时和经济地测定和量化样品中的抗原或抗体，被视为生物样品定量检测的金标准。为了获取最准确的实验结果，应尽可能消除其他类因素带来的误差和影响，因此需要参照各类不同样本的处理和保存办法进行实验前准备 。BUNSEN本生本文将为大家准备了一份ELISA样本收集/保存/运输的相关资料。

　　ELISA进行临床检验常见的样本一般包括血清、血浆、尿液、粪便、细胞、动物组织、植物组织、胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液等，这些样本的收集、处理的方法和保存都有一定的要求，如果处理不当，会直接影响到之后的正式试验。

　　一、样本的收集及处理方法

　　1、血清

　　干燥管(黄色)或促凝管(红色)收集全血，室温自然凝固10-20min，离心5-10min(2500-3500rpm)。采血过程中应避免溶血，仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心;

　　注意事项：根据自身实验需要，取适量上清液可进行ELISA测定。 请注意指标说明书上对于抗凝血剂是否有特殊要求，如有特殊要求，需按照说明书提示进行操作，建议使用EDTA。血浆中除含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成分均与血清相同。制备血浆标本需借助于抗凝剂EDTA，因为抗凝不完全的标本会因纤维蛋白原干扰实验而造成假阳性。

　　2.血浆

　　抗凝管(紫色、黑色、绿色)收集全血，采集后马上混匀，静置10min左右，离心5-10min(2500-3500rpm)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心;

　　3.尿液

　　用无菌管收集，离心10-20min(2500-3500rpm)，仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心;

　　4.粪便

　　用无菌 15ml 离心管收集, 1g 样本+9ml PBS(0.01M，pH=7.4)，充分匀浆完离心5-10min(2500-3500rpm/min)，取上清备用;

　　5. 细胞

　　检 测 分 泌 性 的 成 份 ： 用 无 菌 管 收 集 ， 5-10min(2500-3500rpm)，仔细收集上清;

　　细胞内指标：吸去培养板内的培养基，胰酶消化细胞，收集细胞沉淀，PBS(0.01M，PH=7.4)清洗一次，PBS 稀释细胞悬液，细胞浓度达到 1×106个/ml 左右，充分研磨后超声裂解(用超声细胞破碎仪，300W功率，每次超声3～5秒，间隔30秒，重复4～5次)，或反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份，离心5-10min(2500-3500rpm)，取上清备用;

　　6.动物组织

　　用无菌 15ml 离心管收集, 组织重量不能低于 50mg，1g 组织加入 9ml PBS(0.01M，PH=7.4)，手工或匀浆器将标本匀浆充分，匀浆过程中，PBS 分 2 次加进去，这样匀浆更充分。充分匀浆完离心 5-10min(2500-3500rpm/min)。取上清备用(切勿加入细胞裂解液);

　　7.植物组织

　　用无菌15ml离心管收集, 组织重量不能低于 50mg，1g 组织加入 9ml PBS(0.01M，PH=7.4)，手工或匀浆器将标本匀浆充分，匀浆过程中，PBS 分 2 次加进去，这样匀浆更充分。充分匀浆完离心 5-10min(2500-3500rpm)。取上清备用(切勿加入细胞裂解液);

　　8.牛奶

　　8000rpm 高速离心，离心后分三层，第一层是脂肪层，中间层是乳清，底层是固态蛋白，取中间层保存备用 。乳清量参照血清量;

　　9.胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液

　　处理方法同尿液。

　　注意事项

　　1)不能检测含NaN₃的样品，因NaN₃ 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性;

　　2)收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎，释放大量的过氧化物酶，会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)的酶促反应，造成检测结果的不确定性;

　　3)在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物，室温混匀后使用;

　　4)若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差;

　　5)对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差。

　　二、样本的保存与运输

　　保存

　　样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。

　　运输

　　使用冰袋或干冰运输，确保运输到达里面的冰袋或干冰未融化，运输时间应尽量短。

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