多色免疫荧光为什么也叫做多重免疫组化?

　　多色荧光免疫组化

　　多靶标免疫组化研究全套解决方案

　　多靶点标记技术旨在同一张切片上同时检测多个靶标分子，从而进行不同靶标之间共表达和共定位分析、丰度检测、异质性分析、细胞表型统计以及复杂的组织微环境描述等。

　　该技术是基于TSA(Tyramide Signal Amplification )酪胺信号放大技术的组织切片多重标记方案，利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记，提高检测的灵敏度，大幅提高信噪比甚至达千倍以上。它可使用同一动物来源的一抗，进行同一组织切片上多种marker的荧光多重标记。同时由于具有的信号放大性能，它可将信号强度完成10-100倍的信号提升，大大提高对于弱信号及不易标记的蛋白的探测灵敏度。

　　多色免疫荧光(mIHC)被称为多重免疫组化的原因主要基于其技术原理和应用特性：

　　一、技术原理的同源性

　　核心方法继承自免疫组化‌

　　采用与常规免疫组化(IHC)相同的抗体-抗原结合原理，通过一抗和二抗的级联反应定位靶蛋白‌

　　使用辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗进行信号放大，这与传统IHC的DAB显色机制高度相似‌

　　信号放大技术的延续‌

　　均依赖酪胺信号放大(TSA)技术，通过HRP催化荧光底物共价结合靶蛋白，实现信号原位固定‌

　　每轮染色后通过热修复剥离抗体，仅保留共价结合的荧光信号，此流程与IHC的显色-终止步骤逻辑一致‌

　　二、应用场景的扩展性

　　多重检测能力的升级‌

　　传统IHC通常仅能检测单一靶点，而mIHC通过多轮循环染色可同时标记5-9种靶蛋白‌

　　保留了IHC的组织原位分析优势，同时实现多参数检测，故称为"多重"免疫组化‌

　　结果呈现形式的兼容性‌

　　最终检测虽为荧光信号，但样本处理流程(固定、包埋、切片)与IHC完全一致‌

　　荧光标记可转换为虚拟DAB染色图像，满足病理诊断的标准化需求‌

　　三、命名的学术共识

　　命名依据‌ ‌关联技术特征‌ ‌支持文献‌

　　"免疫组化"称谓 基于抗体-抗原结合的组织原位检测本质‌ ‌

　　"多重"前缀 多轮循环染色实现多靶标共定位‌ ‌

　　"荧光"标注 最终信号检测采用多色荧光通道‌ ‌

　　该技术名称完整反映了其作为IHC技术的高阶形态特性，同时明确了荧光检测的创新维度‌。

　　Multiplex IHC，简称mIHC，直译多重免疫组化，也叫多重荧光组化、多色免疫荧光、荧光多色标记等，到底是组化还是荧光?初次接触的人有些懵，下面就要从它的原理给大家解释下，为什么呈现的是荧光图像而同时我们又称之为组化又没错,要想充分明白这个问题，我们从以下几个方面来解释：

　　1-mIHC的基本原理

　　mIHC实验是基于使用酪胺-荧光基团检测开发的。其实验步骤使用序列标记策略，每轮标记包含一抗孵育和二抗孵育。随后是酪胺-荧光基团偶联物沉淀。接下来将抗体hrp剥离，或在微波炉或者高温中加热，去除样本中的抗体，所有沉淀的荧光基团，仍与样本共价结合。mIHC的基本原理：内源性过氧化物酶封闭--抗原修复--一抗孵育--hrp二抗--显色(荧光显色沉淀)，由此可见，这基本就是免疫组化的经典原理;只不过mIHC重复了组化的两次(双标) 三次(三标)甚至六次(六标七色)，后一步再做个负染dapi(类似于组化的苏木素负染)!

　　2-为什么使用多重而非单染色IHC?

　　如果您的研究方向是探索不同细胞类型之间的交互作用，或者需要评价多个生物标志物和组织的表达或共定位，可以使用mIHC实验。

　　3-mIHC实验的抗体使用

　　使用经过高度验证的抗体，确保得到可靠的结果。通常而言经过IHC-P验证的抗体，同样也能在mIHC中使用，但需要再进行实验步骤优化。

　　本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。