辅酶 II NADP(H)含量检测试剂盒(MTT 显色法)说明书

　　微量法

　　规格：100T/48S

　　产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

　　试剂名称 规格 保存条件

　　酸性提取液 液体 25 mL×1 瓶 2-8℃保存

　　碱性提取液 液体 25 mL×1 瓶 2-8℃保存

　　试剂一 液体 10 mL×1 瓶 2-8℃保存

　　试剂二 粉剂×1 支 -20℃保存

　　试剂三 液体 8mL×1 瓶 2-8℃保存

　　试剂四 A 粉剂×1 支 -20℃保存

　　试剂四 B 液体 5mL×1 瓶 2-8℃保存

　　试剂五 液体 30 mL×1 瓶 2-8℃保存

　　试剂六 液体 50 mL×1 瓶 2-8℃保存

　　NADP 标准品 粉剂×1 支 -20℃保存

　　NADPH 标准品 粉剂×1 支 -20℃保存

　　溶液的配制：

　　1、 试剂二：临用前加入 4mL 蒸馏水充分混匀，溶解后 2-8℃保存 4 周。

　　2、 试剂四：临用前将试剂四 A 溶解到试剂四 B 中，溶解后加入 5mL 蒸馏水，分装保存，避免反复冻融，-20℃保存 4 周。

　　3、 NADP 标准品：临用前加入 1.27 mL 蒸馏水，即 5 μmol/mL，-20℃可以保存 2 周。

　　4、 NADPH 标准品：临用前加入 1.2 mL 蒸馏水，即 5 μmol/mL，-20℃可以保存 2 周。

　　产品说明：

　　辅酶Ⅱ NADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NADP+和 NADPH 含量测定可以计算 NADP(NADPH + NADP+)含量和 NADPH/NADP+比值，其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一，而且在 PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。

　　需自备的仪器和用品：

　　可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、研钵/匀浆器、超声破碎仪、可调式移液器、微量玻璃比色皿

　　/96孔板、冰和蒸馏水。

　　操作步骤：

　　一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

　　1、血清(浆)中 NADP+和 NADPH 的提取：

　　NADP+的提取：取 0.1mL 血清(浆)，加入 0.5mL 酸性提取液，煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min;取上清 200μL，加入等体积碱性提取液;混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清，冰上保存待测。

　　NADPH 的提取：取 0.1mL 血清(浆)，加入 0.5mL 碱性提取液，煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200μL，加入等体积酸性提取液;混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清，冰上保存待测。

　　2、组织中 NADP+和 NADPH 的提取：

　　NADP+的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.5mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200μL，加入等体积碱性提取液混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清，冰上保存待测。

　　NADPH 的提取：称取约 0.1g 组织，加入 0.5mL 碱性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴冷却后，10000g 4℃离心 10min，取上清 200μL，加入等体积酸性提取液混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清，冰上保存待测。

　　3、细胞或细菌中 NADP+和 NADPH 的提取：

　　NADP+的提取：收集 500 万细胞或细菌，加入 0.5mL 酸性提取液，超声波破碎 1min(功率 200W，超声 2s，停 1s)，煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液 200μL 至另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清，冰上保存待测。NADPH 的提取：收集 500 万细胞或细菌，加入 0.5mL 碱性提取液，超声波破碎 1min(功率 200W，超声 2s，停 1s)，煮沸 5min(盖紧，以防止水分散失)，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心 10min，取上清液 200μL 至另一新的离心管中，加入等体积的酸提取液使之中和，混匀，10000g 4℃离心 10min，取上清，冰上保存待测。

　　二、测定步骤

　　1、 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上，调节波长至 570 nm，分光光度计蒸馏水调零。

　　2、 NADP 标准品：用蒸馏水稀释为 2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039、0nmol/mL 的标准溶液(0nmol/mL即空白管)。

　　3、 NADPH 标准品：用蒸馏水稀释为 1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0nmol/mL 的标准溶液(0nmol/mL即空白管)。

　　4、 稀释表(附于说明书最后)

　　辅酶 II NADP(H)含量检测试剂盒 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。本生试剂盒