技术分享：蛋白质电泳常用试剂配制方法

蛋白质电泳常用试剂配制方法

一、3×SDS-PAGE loading buffer的配制

3×SDS-PAGE loading buffer	10ml
1M Tris-Hcl (PH 6.8)	1.5ml
SDS	0.6g
BPB(溴酚蓝)	30mg
甘油（丙三醇）	3ml
去离子水	5.5ml

1、将除BPB以外的药品完全溶解。SDS常温下很难溶解，可以在37℃水浴溶解。完全溶解后，再加入BPB，进行溶解；

2、把溶好的buffer分装到1.5ml的离心管中，1ml/管，常温放置；

3、使用前，每管加入30µL巯基乙醇。

注意事项：巯基乙醇为危险品，加入的过程在通风橱中完成，并且带好手套。

二、10×PBS的配制

0.1M PBS（10×PBS）	1L
NaH2PO4.2H2O	2.83g
Nacl	85g
Na2HPO4.12H2O	28.98g

1、用去离子水将以上药品进行溶解；（溶解的非常慢，可能需要过夜）

2、调PH值到7.2，用0.4µm的滤膜过滤。常温保存；

3、工作时用的是1×PBS。

三、1.5M Tris-Hcl (PH 8.8) 的配制

1.5M Tris-Hcl	250ml
Tris	45.425g

1、用200ml去离子水将Tris溶解。

2、用浓盐酸调PH值到8.8。

3、调好PH的Tris-Hcl定容到250ml。

4、0.4µm的滤膜过滤，常温保存。

注意事项：Tris的缓冲能力很强，调PH值时，费些时间，但不要调过。

四、1M Tris-Hcl (PH 6.8) 的配制

1M Tris-Hcl	250ml
Tris	30.275g

1、用200ml去离子水将Tris溶解；

2、用浓盐酸调PH值到6.8；

3、调好PH的Tris-Hcl定容到250ml；

4、0.4µm的滤膜过滤，常温保存。

五、30%丙烯酰胺的配制

30%丙烯酰胺	250ml
丙烯酰胺	72.5 ml
BIS甲叉丙烯酰胺	2.5 ml

1、把药品用去离子水溶解后定容到250ml；

2、用滤纸过滤，放在棕色瓶子中，4℃保存。

注意事项：两种药品有毒性，配制过程要带手套和口罩。

六、10%SDS的配制

1．1g SDS加入10ml去离子水进行溶解；

2．分装到1.5ml离心管中，-20℃保存。

七、10%过硫酸a的配制

1．1g 过硫酸a加入10ml去离子水进行溶解。

2．分装到1.5ml离心管中，-20℃保存。

八、5×SDS-PAGE电泳缓冲液的配制

5×SDS-PAGE电泳缓冲液	1L
Tris	15.1g
Glycine（甘氨酸）	94g
SDS	5g

将以上药品用去离子水溶解后定容到1L，常温保存。工作时用的是1×SDS-PAGE电泳缓冲液。

九、考马斯亮蓝R-250染色液的配制

1、往1g考马斯亮蓝R-250中加入250ml异丙醇，在磁力搅拌器上搅拌六小时以上；

2、加入650ml去离子水，磁力搅拌器搅拌过夜；

3、再加入100ml冰s酸进行溶解，磁力搅拌器搅拌；

4、在通风橱内用滤纸进行过滤。常温保存。染色液只能反复用两次。

注意事项：在磁力搅拌器上搅拌时，要把容器封口。

十、脱色液的配制

脱色液	1L
醋酸（冰乙酸）	100ml
乙醇（无水乙醇）	50ml
去离子水	850ml

常温保存。

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