一步一解：揭秘双抗体夹心法ELISA的层层放大与显色原理

　　ELISA试剂盒双抗夹心法的检测原理

　　双抗体夹心法是检测抗原常用的方法，操作步骤如下：

　　1) 将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。

　　2) 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。

　　3) 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。

　　

 

　　4) 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。

　　双抗体夹心法ELISA的核心原理

　　双抗体夹心法通过‌固相抗体-抗原-酶标抗体‌的“夹心”结构实现目标抗原的高灵敏度检测，其核心步骤包括：

　　固相抗体固定‌：将捕获抗体(如抗目标抗原的特异性抗体)固定在微孔板表面，形成固相载体‌。

　　抗原结合与清洗‌：样本中的目标抗原与固相抗体结合，洗涤去除未结合杂质，减少背景干扰‌。

　　酶标抗体结合‌：加入标记酶(如HRP)的检测抗体，与抗原的另一表位结合，形成“夹心”复合物‌。

　　信号放大与显色‌：酶催化底物(如TMB)反应生成有色产物，显色强度与抗原浓度成正比‌。

　　在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应，作一步检测。

　　注：以上资料供参考，不作为实验依据，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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