如何选择ELISA检测方法：直接法与间接法的全面指南

　　如何选择ELISA检测方法：直接法与间接法的全面指南

　　ELISA直接法与间接法详细介绍

　　一、 直接法 ELISA

　　1. 原理：

　　直接将酶(如HRP或ALP)标记在特异性的一抗上。该一抗直接与固相载体上包被的抗原结合，然后通过加入酶的底物产生信号进行检测。

　　2. 流程步骤：

　　包被： 将已知抗原固定在微孔板底部。

　　封闭： 加入无关蛋白(如BSA)封闭空位，防止非特异性结合。

　　加一抗(酶标)： 加入已经连接了酶的特异性一抗，孵育、洗涤。

　　加底物： 加入酶促反应的底物。

　　检测： 测定颜色变化(或发光)的信号强度，其与样本中抗原含量成正比。

　　3. 优点：

　　操作快速： 步骤少，节省时间。

　　交叉反应风险低： 只有一个抗体参与，避免了二抗可能引起的非特异性交叉反应。

　　适用于高通量： 流程简洁，适合快速筛查。

　　4. 缺点：

　　灵敏度相对较低： 缺乏信号放大作用。

　　灵活性差： 每种特定的一抗都需要单独进行酶标记，成本高且工作量大。

　　信号强度有限： 每个抗原分子只能结合一个酶分子。

 

　　二、 间接法 ELISA

　　1. 原理：

　　使用未标记的一抗与抗原结合，然后再使用酶标记的二抗与一抗的Fc段结合。这里的二抗是抗一抗(来自某种动物)的抗体。

　　2. 流程步骤：

　　包被 与 封闭： 同直接法。

　　加一抗： 加入未标记的特异性一抗，孵育、洗涤。

　　加二抗(酶标)： 加入酶标记的二抗，该二抗能识别一抗的物种来源(如兔抗小鼠IgG)，孵育、洗涤。

　　加底物 与 检测： 同直接法。

　　3. 优点：

　　高灵敏度： 一个一抗分子可以结合多个二抗分子，实现信号放大，检测下限更低。

　　灵活性高、成本低： 一种酶标记的二抗可以用于所有来自同一物种的一抗，无需为每个一抗单独标记，大大节省了成本和准备工作。

　　信号强： 信号放大效应使得检测信号更强。

　　4. 缺点：

　　操作步骤多、时间长： 多了一步二抗孵育和洗涤。

　　交叉反应风险较高： 二抗可能与包被蛋白或样本中其他成分发生非特异性结合。

　　需要物种匹配： 二抗必须与一抗的宿主物种正确匹配。

　　核心差异总结对比表

 

　　如何选择?

　　选择直接法当： 您需要快速得到结果，正在进行高通量筛查，或者担心交叉反应问题。许多商业化的、即用型的检测试剂盒采用直接法以保证稳定性和简便性。

　　选择间接法当： 您的首要目标是高灵敏度，您正在研究多种不同的靶标但一抗都来自同一物种(如小鼠)，或者希望节约成本。绝大多数实验室的科研ELISA实验都采用间接法。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

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