人双链RNA（dsRNA）ELISA试剂盒实验说明书

　　人双链RNA(dsRNA)ELISA试剂盒实验说明书

　　BS-11085人双链RNA(dsRNA)ELISA试剂盒

　　产品概述

　　本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫法(ELISA)原理，专用于检测体外转录mRNA制剂或生物样本中dsRNA残留量。核心抗体为J2(IgG2a)捕获抗体和K2(IgM)检测抗体，可特异性识别≥30bp的dsRNA分子，不受核苷酸序列或修饰类型影响。

　　检测原理

　　固相包被：预包被J2抗体的酶标板捕获样本中dsRNA;

　　信号放大：加入生物素标记的K2抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物;

　　显色检测：通过Streptavidin-HRP催化TMB显色，450nm波长读取吸光度值，与dsRNA浓度呈正相关。

　　试剂盒组成

　　组分规格储存条件

　　预包被酶标板2×96孔4℃(短期)/-20℃(长期)

　　dsRNA标准品(STD1-4)4种修饰类型-80℃

　　生物素标记检测抗体1瓶(200μL)-20℃避光

　　TMB显色液12mL×2瓶4℃避光

　　实验步骤

　　样本前处理

　　mRNA样本：需经DNase/RNase处理去除单链RNA干扰。

　　血液/组织样本：推荐使用TRIzol法提取总RNA，溶解于DEPC水中。

　　ELISA操作流程

　　加样：标准品/样本(100μL/孔)→ 37℃孵育1小时;

　　洗涤：PBST洗涤3次;

　　加检测抗体：生物素标记K2抗体(1:100稀释)→ 37℃孵育1小时;

　　显色：加入TMB显色液避光反应15分钟，2M H₂SO₄终止;

　　读数：酶标仪450nm检测，参考波长630nm。

　　数据分析

　　标准曲线：四参数拟合(建议范围：0.0156-2pg/μL)。

　　灵敏度：LOD≤0.001pg/μL(无修饰dsRNA) 。

　　精密度：批内/批间CV<15%^^3^^。

　　注意事项

　　干扰因素：避免反复冻融样本，防止dsRNA降解;

　　抗体保存：检测抗体需分装保存，避免反复冻融;

　　质控要求：每批次实验需包含空白孔及阳性对照孔。

　　注：仅供科研使用，以上资料供参考，如需具体产品说明请咨询技术老师或品牌供应商。

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