人血小板相关抗体IgM(PA-IgM)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　人血小板相关抗体IgM(PA-IgM)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-0886 人血小板相关抗体IgM(PA-IgM)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心法检测PA-IgM水平。微孔板预包被抗PA-IgM抗体，样本中PA-IgM与捕获抗体结合后，加入HRP标记的检测抗体形成复合物。经TMB底物显色后，450nm波长测定吸光度(OD值)，浓度与显色强度呈正相关。

　　二、试剂盒组成

　　包被微孔板：8孔×12条(预包被抗PA-IgM抗体)

　　标准品：6瓶(含PA-IgM蛋白、稳定剂等)

　　酶标抗体：HRP标记PA-IgM抗体(5.2ml×1)

　　缓冲液：

　　标准品稀释液(15ml×1)

　　浓洗涤液(25ml×1，含PBS、Triton X-100)

　　底物缓冲液(33ml×1，含枸橼酸、过氧化氢)

　　其他：终止液(6ml×1)、OPD片剂(6片)、说明书。

　　三、样本处理

　　血清：室温凝固10-20分钟，2000-3000rpm离心20分钟，取上清。

　　血浆：EDTA抗凝，离心后收集上清(避免溶血)。

　　保存：-20℃避免反复冻融，检测前室温平衡。

　　四、实验步骤

　　加样：每孔依次加入标准品/样本(50μL)、酶标抗体(100μL)，37℃孵育1小时。

　　洗涤：用洗涤液洗板5次，拍干。

　　显色：加入TMB底物(100μL/孔)，避光反应15分钟。

　　终止：加入终止液(50μL/孔)，立即测定OD值。

　　五、结果计算

　　以标准品浓度(μg/ml)为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。

　　根据样本OD值通过曲线方程计算PA-IgM浓度。

　　六、注意事项

　　试剂需2-8℃保存，避免冷冻。

　　不同批次试剂勿混用。

　　加样需精确，避免气泡干扰。

　　显色后30分钟内完成检测。

　　七、性能参数

　　检测范围：0.3-14μg/ml(参考IgM类试剂盒)

　　灵敏度：≤0.1μg/ml

　　重复性：CV<10%

　　有效期：6个月(2-8℃)

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