人泛素连接酶(E3UBPL)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　人泛素连接酶(E3UBPL)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-1472人泛素连接酶(E3/UBPL)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测人样本中E3UBPL蛋白浓度。包被抗体与目标蛋白结合后，通过酶标记的二抗形成复合物，加入底物后显色，吸光度与样本中E3UBPL浓度成正比。

　　二、试剂盒组成

　　组分规格保存条件

　　预包被微孔板96孔/板2-8℃避光保存

　　标准品2支-20℃冻存

　　酶标二抗12mL2-8℃避光保存

　　显色底物A/B各6mL2-8℃避光保存

　　终止液6mL室温避光保存

　　洗涤缓冲液(20×)50mL室温保存

　　样本稀释液12mL2-8℃保存

　　三、样本要求

　　血清：采集后室温静置30分钟，离心(2000×g，15分钟)取上清，避免溶血。

　　血浆：EDTA抗凝，离心(2000×g，15分钟)取上清。

　　细胞上清：离心(1000×g，10分钟)去除杂质。

　　保存：样本需分装冻存，避免反复冻融，检测前平衡至室温。

　　四、实验步骤

　　试剂准备：

　　洗涤液配制：将20×浓缩液用蒸馏水稀释至1×工作液。

　　标准品稀释：用样本稀释液将标准品按说明稀释为系列浓度梯度。

　　加样：

　　设置空白孔、标准孔、样本孔各2孔。

　　标准孔加入50μL不同浓度标准品，样本孔加入50μL待测样本。

　　每孔加入酶标二抗100μL，37℃孵育1小时。

　　洗涤：

　　甩尽孔内液体，用1×洗涤液洗涤5次，每次静置1分钟，拍干。

　　显色：

　　每孔加入底物A/B各50μL，37℃避光孵育15分钟。

　　终止与测定：

　　每孔加入终止液50μL，混匀后立即用酶标仪测定450nm波长吸光度。

　　五、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

　　根据样本吸光度值，通过标准曲线方程计算E3UBPL浓度。

　　样本浓度=计算值×样本稀释倍数。

　　六、注意事项

　　试剂平衡：所有试剂使用前需平衡至室温(25±2℃)。

　　加样精度：使用校准移液器，避免气泡产生。

　　避免污染：不同组分使用独立吸头，防止交叉污染。

　　显色控制：显色时间需严格控制，避免过度反应。

　　数据有效性：标准曲线相关系数R²应≥0.99，否则需重做实验。

　　七、技术参数

　　灵敏度：检测下限≤0.1ng/mL。

　　重复性：板内/板间变异系数均<10%。

　　特异性：与相似蛋白无交叉反应。

　　回收率：85%-115%。

　　线性范围：0.5-16ng/mL。

　　八、储存与有效期

　　未开封试剂盒：2-8℃保存，有效期12个月。

　　开封后微孔板：密封干燥剂保存，1个月内用完。

　　避免冷冻液体组分。

　　九、安全提示

　　终止液含强酸，操作时佩戴防护装备。

　　废弃试剂按生物危害品处理。

　　实验后彻底清洁台面。

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