人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　本试剂盒采用双抗体夹心法原理，通过特异性抗体捕获样本中的bFGF，结合酶标记二抗形成免疫复合物，经TMB底物显色后定量检测。bFGF作为缺乏信号肽的分泌型蛋白(分子量18kDa)，在血管生成、组织修复等生理过程中发挥关键作用。实验需注意其与肝素的高亲和性，样本处理时需避免含肝素抗凝剂。

　　试剂准备与样本处理

　　标准品配制：冻干bFGF标准品需用超纯水复溶至≥100μg/mL，梯度稀释至15.63-1000 pg/mL范围，避免反复冻融。

　　样本类型：

　　血清/血浆：使用EDTA抗凝，离心后取上清;溶血或高脂样本需预处理。

　　细胞培养上清：1000×g离心20分钟去除杂质，建议添加蛋白酶抑制剂。

　　组织匀浆：PBS裂解后离心取上清，蛋白浓度建议调整至1-10 μg/mL。

　　特殊要求：若样本浓度超出检测范围，需按100-100000倍稀释(分步稀释，每步≤100倍)。

　　实验操作流程

　　包被与孵育：

　　抗bFGF单抗包被微孔板(4℃过夜)，37℃封闭1小时。

　　加入样本或标准品，37℃孵育1小时，洗涤后加入生物素化二抗。

　　显色与检测：HRP标记链霉亲和素孵育15分钟，TMB显色3-5分钟，2Mliusuan终止反应，450nm测OD值。

　　数据分析与注意事项

　　标准曲线：四参数逻辑拟合，R²需>0.99，灵敏度为8 pg/mL。

　　干扰因素：避免使用肝素抗凝剂，化学裂解液可能导致偏差。

　　样本保存：短期检测可4℃保存，长期需-80℃分装，避免反复冻融。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

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