人载脂蛋白A2(apo-A2)ELISA试剂盒实验使用说明书

    人载脂蛋白A2(apo-A2)ELISA试剂盒实验使用说明书
    本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA），用于体外定量检测血清、血浆或组织匀浆样本中的人载脂蛋白A2（apo-A2）浓度。以下为详细操作指南。
    一、试剂盒组分
    预包被酶标板‌：8×6孔或8×12孔，含包被抗体。
    标准品‌：冻干粉，需用标准品稀释液复溶。
    标准品/样品稀释液‌：用于稀释标准品和样本。
    生物素化检测抗体（100×）‌：需用生物素化检测抗体稀释液稀释。
    生物素化检测抗体稀释液‌：稀释检测抗体。
    SABC复合物‌：链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物。
    TMB显色液（A/B）‌：A液为TMB底物，B液为稳定剂。
    终止液‌：2M硫酸溶液。
    20×浓缩洗涤液‌：需用蒸馏水稀释。
    封板胶纸‌：用于封板。
    产品说明书‌：含完整操作流程。
    二、样本收集与处理
    血清/血浆‌：使用无热原、无内毒素试管采集，避免溶血或脂浊。室温静置2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟，取上清。短期保存（2-8℃）不超过48小时，长期保存需-20℃或-80℃冷冻，避免反复冻融。
    组织匀浆‌：按比例加入生理盐水匀浆，离心取上清。
    细胞培养上清‌：直接离心去除杂质。
    三、实验步骤
    试剂准备‌：
    洗涤液：用蒸馏水按1:20稀释浓缩洗涤液。
    标准品：复溶后按说明书进行倍比稀释（如1:2、1:4等），配制7个浓度梯度。
    生物素化检测抗体：用稀释液按1:100稀释。
    加样‌：
    每孔加入100μL标准品或样本（建议设复孔）。
    加入100μL稀释后的生物素化检测抗体。
    孵育‌：
    37℃避光孵育60分钟。
    洗涤‌：
    倒扣拍干，每孔加入350μL洗涤液，浸泡1-2分钟，重复5次。
    显色‌：
    每孔加入100μLSABC复合物，37℃孵育20分钟。
    洗涤5次后，加入100μLTMB显色液（A/B等量混合），避光孵育15-20分钟，观察梯度显色。
    终止与检测‌：
    加入50μL终止液，孔内溶液变黄。
    450nm波长（参考波长630nm）测定OD值，双波长更准确。
    四、数据分析
    以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（建议R²>0.99）。
    样本浓度通过标准曲线计算，若OD值超出线性范围，需稀释后重测。
    五、注意事项
    试剂保存‌：未开封试剂2-8℃保存，避免强光；开封后稳定性约30天。
    样本处理‌：避免溶血、脂浊或反复冻融，离心确保澄清。
    操作细节‌：
    显色时间控制：TMB显色至S1/S2孔深蓝色、S5孔淡蓝色时终止。
    孵育温度和时间：严格按说明书，避免挥发或污染（建议加盖）。
    质量控制‌：
    标准曲线梯度：确保各点OD值呈现明显梯度。
    空白孔：控制背景信号。
    异常排查：如标准曲线无梯度，检查稀释准确性、抗体浓度或孵育条件。
    注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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