大鼠骨粘连蛋白(ON）ELISA试剂盒实验使用说明书

    大鼠骨粘连蛋白(ON)ELISA试剂盒实验使用说明书
    BS-3202 大鼠骨粘连蛋白(ON)ELISA试剂盒
    一、实验原理
    本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠骨粘连蛋白（ON）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠骨粘连蛋白（ON）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品含量。
    二、试剂盒组成
    酶标板（预包被抗体）
    标准品（不同浓度梯度）
    HRP标记的检测抗体
    底物TMB溶液
    终止液（如2M硫酸）
    洗涤缓冲液
    样本稀释液
    封板膜
    说明书（含操作步骤和注意事项）
    三、样本收集与处理
    1.血清样本
    使用不含热原和内毒素的试管收集血液。
    室温放置30分钟至1小时，待血液凝固后，3000-4000转/离心15分钟，小心分离血清。
    避免溶血，操作过程中避免任何细胞刺激。
    短期保存于2-8℃，长期保存于-20℃或更低温度，避免反复冻融。
    2.血浆样本
    使用EDTA或肝素作为抗凝剂收集血液。
    30分钟内离心分离血浆（3000-4000转/离心15分钟）。
    保存条件同血清样本。
    3.组织匀浆样本
    将组织块在预冷的生理盐水中漂洗，去除血液。
    称取适量组织，加入适量生理盐水，用匀浆器制成匀浆。
    3000-4000转/离心10分钟，取上清液进行检测。
    保存条件同血清样本。
    四、实验步骤
    准备试剂‌：所有试剂在使用前需平衡至室温（20-25℃）。
    加样‌：
    设置标准品孔、样本孔和空白孔。
    标准品孔中加入不同浓度的标准品各50μL。
    样本孔中加入待测样本50μL。
    空白孔不加。
    加检测抗体‌：每孔加入HRP标记的检测抗体100μL（除空白孔外）。
    温育‌：37℃避光温育30分钟。
    洗涤‌：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干。每孔加满洗涤液，静置1分钟后弃去，重复洗涤5次，每次洗涤后拍干。
    显色‌：每孔先加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL，37℃避光显色15分钟。
    终止反应‌：每孔加入终止液50μL，此时蓝色会转变为黄色。
    测定‌：在450nm波长下测定各孔的OD值（建议在加终止液后15分钟内完成测定）。
    五、注意事项
    试剂保存‌：试剂盒应保存于2-8℃，切勿冷冻。保质期通常为6个月，生产日期、有效期、生产批号见外包装。
    实验操作‌：
    实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
    建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。
    若显色过浅，可适当延长底物温育时间。
    为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。
    酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
    底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
    试剂盒使用‌：
    在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品不得使用。
    不同批号的试剂不得混用。
    本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断。
    样本处理‌：
    样本溶血、脂血或反复冻融可能导致检测结果不准确。
    检测前请确保样本无沉淀、浑浊或微生物污染。
    六、结果计算与解释
    标准曲线绘制‌：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。推荐使用专业软件进行曲线拟合，如四参数逻辑曲线拟合。
    样本浓度计算‌：根据样本的OD值，在标准曲线上查出对应的浓度，再乘以稀释倍数（如有），即为样本中待测物质的实际浓度。
    结果解释‌：实验结果仅供参考，具体解释需结合实验设计和样本背景。
    七、常见问题解答
    显色过浅‌：可能原因包括温育时间不足、检测抗体浓度过低或样本中待测物质含量过低。可适当延长温育时间或优化样本稀释倍数。
    显色过深‌：可能原因包括温育时间过长、检测抗体浓度过高或样本中待测物质含量过高。可适当缩短温育时间或优化样本稀释倍数。
    重复性差‌：可能原因包括加样不准确、洗涤不彻底或温育条件不稳定。建议检查加样设备、优化洗涤步骤并确保温育箱温度稳定。
    八、安全注意事项
    试剂盒中的部分试剂可能具有腐蚀性或刺激性，操作时请佩戴适当的防护装备，如手套和护目镜。
    终止液（如2M硫酸）具有腐蚀性，避免接触皮肤和眼睛。
    实验废弃物应按照当地环保法规进行妥善处理。
    如有任何技术问题或需要进一步的帮助，请联系试剂盒供应商的技术支持部门。提供产品批号、生产日期和具体问题描述，以便我们更高效地为您服务。
    注：以上仅供参考！
    大鼠骨粘连蛋白(ON）ELISA试剂盒实验使用说明书本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴！