大鼠降钙素基因相关肽受体(CGRPR)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　大鼠降钙素基因相关肽受体(CGRPR)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-3527大鼠降钙素基因相关肽受体(CGRPR)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)技术。通过将抗大鼠CGRPR单克隆抗体包被于微孔板制成固相载体，样本中的CGRPR与包被抗体结合后，加入生物素标记的抗CGRPR抗体形成免疫复合物，再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素结合，加入底物TMB显色，显色深浅与样本中CGRPR浓度呈正相关，通过酶标仪测定OD值计算浓度。

　　二、试剂盒组分

　　预包被抗大鼠CGRPR单抗的微孔板(96孔/48孔)

　　标准品(6个浓度梯度，如0-1000 pg/mL)

　　生物素标记的检测抗体

　　HRP标记的链霉亲和素

　　TMB显色底物溶液

　　终止液(2M硫酸)

　　浓缩洗涤液(20×，需蒸馏水稀释)

　　样本稀释液

　　封板膜

　　三、样本要求

　　1. 样本类型

　　血清/血浆：采集后静置30分钟，3000 rpm离心10分钟，取上清液。

　　组织匀浆：按100 mg组织加入1 mL生理盐水比例匀浆，离心取上清。

　　细胞培养上清：离心去除细胞碎片后取上清。

　　2. 样本保存

　　短期(≤7天)：2-8℃保存。

　　长期(>7天)：-20℃或-70℃保存，避免反复冻融。

　　四、实验步骤

　　1. 标准品配制

　　将标准品用样本稀释液按比例稀释为6个浓度梯度(如1000、500、250、125、62.5、0 pg/mL) 。

　　2. 加样

　　每孔加入100 μL标准品或样本(每个样本设3个复孔) 。

　　空白孔加入100 μL样本稀释液。

　　37℃孵育90分钟。

　　3. 洗涤

　　弃去孔内液体，每孔加入300 μL洗涤液(1×)，静置1分钟后甩干，重复5次。

　　4. 加生物素标记抗体

　　每孔加入100 μL生物素标记抗体，37℃孵育60分钟。

　　5. 加HRP标记链霉亲和素

　　每孔加入100 μL HRP标记物，37℃孵育30分钟。

　　6. 显色与终止

　　每孔加入90 μL TMB底物，37℃避光孵育15-20分钟。

　　每孔加入50 μL终止液终止反应。

　　7. 检测

　　用酶标仪在450 nm波长处测定各孔OD值。

　　五、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标(X)，OD值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。根据样本OD值从标准曲线中计算对应浓度，若样本OD值超过最高标准品浓度，需用样本稀释液稀释后重新测定。

　　六、注意事项

　　试剂保存：未开封试剂盒于-20℃保存，开封后部分试剂需4℃保存(如TMB底物)。

　　洗涤操作：充分洗涤避免残留，影响结果准确性。

　　样本处理：避免溶血、脂血样本，必要时离心后取上清。

　　有效期：试剂盒有效期6个月，建议尽快使用。

　　质量控制：每批实验需设空白孔和标准曲线，确保R²>0.95。

　　七、常见问题解决

　　OD值过高：可能样本浓度过高，需稀释后复测。

　　显色不均匀：检查洗涤是否彻底或加样是否准确。

　　标准曲线线性差：重新配制标准品或检查试剂是否失效

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

　　大鼠降钙素基因相关肽受体(CGRPR)ELISA试剂盒实验使用说明书 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴!