猪白介素8(IL-8CXCL8)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　猪白介素8(IL-8CXCL8)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-4569猪白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒

　　以下为猪白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒的标准实验使用说明书，内容基于ELISA通用操作规范及试剂盒典型要求整理，供实验参考：

　　一、实验原理‌

　　本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测猪血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-8/CXCL8。

　　包被抗体‌：固相微孔板预包被抗猪IL-8单克隆抗体。

　　检测抗体‌：生物素标记的抗猪IL-8多克隆抗体。

　　显色系统‌：辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素与底物TMB反应，生成蓝色产物，终止后呈黄色，OD值正比于样本中IL-8浓度。

　　二、试剂盒组成‌

　　组分 96孔配置 48孔配置 保存条件

　　预包被微孔板 1×96孔 1×48孔 2-8℃密封保存

　　标准品(冻干) 1瓶(1350 ng/L) 1瓶(1350 ng/L) 2-8℃避光保存

　　标准品稀释液 1.5 mL 1.5 mL 室温

　　生物素化抗体 6 mL 3 mL 2-8℃避光保存

　　HRP标记链霉亲和素 6 mL 3 mL 2-8℃避光保存

　　样品稀释液 6 mL 3 mL 室温

　　显色剂A液(TMB) 3 mL 1.5 mL 2-8℃避光保存

　　显色剂B液(H₂O₂) 3 mL 1.5 mL 2-8℃避光保存

　　终止液(2M H₂SO₄) 6 mL 3 mL 室温

　　浓缩洗涤液(20×) 20 mL 10 mL 室温

　　三、样本处理‌

　　血清/血浆‌

　　采集后室温静置10-20分钟，2000-3000 rpm离心15分钟，取上清。

　　避免溶血、脂血或反复冻融。

　　短期保存(≤3天)可置于2-8℃，长期保存需分装后-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。

　　细胞上清‌

　　1000×g离心10分钟，去除细胞碎片，取上清检测。

　　四、实验步骤‌

　　试剂准备‌

　　浓缩洗涤液用蒸馏水稀释至1×工作液(如20 mL浓缩液+380 mL水)。

　　标准品梯度稀释：取标准品原液(1350 ng/L)用标准品稀释液倍比稀释至7个浓度(如6750、3375、1687.5、843.75、421.875、210.9375、105.46875 ng/L)，零孔加稀释液。

　　生物素化抗体和HRP标记物使用前15分钟用样品稀释液配制1×工作液。

　　加样‌

　　设标准孔、样本孔、空白孔(仅加稀释液)。

　　每孔加100 μL标准品/样本，37℃孵育90分钟。

　　洗板5次(每孔300 μL洗涤液，静置30秒后拍干)。

　　酶结合‌

　　每孔加100 μL生物素化抗体工作液，37℃孵育60分钟。

　　洗板5次。

　　显色与终止‌

　　每孔加100 μL HRP标记物工作液，37℃孵育30分钟。

　　洗板5次。

　　每孔加90 μL TMB显色液，避光室温孵育15分钟。

　　每孔加50 μL终止液，混匀后10分钟内测定OD值。

　　五、结果计算‌

　　标准曲线绘制‌

　　以标准品浓度为横坐标(X)，OD值为纵坐标(Y)，用四参数逻辑(4PL)或双对数坐标拟合标准曲线。

　　推荐使用专业软件(如ELISACalc)计算，避免手动拟合误差。

　　样本浓度计算‌

　　样本OD值减去空白孔OD值后，通过标准曲线反推浓度。

　　若样本OD值超出标准范围，需用样品稀释液稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

　　六、注意事项‌

　　试剂平衡‌：所有试剂使用前需室温平衡30分钟，避免冷凝水影响精度。

　　加样精度‌：使用校准移液器，加样时间控制在10分钟内，避免蒸发误差。

　　洗涤彻底‌：洗板不充分会导致背景升高，建议使用洗板机并检查吸液是否完全。

　　显色控制‌：TMB显色时间严格控制在15分钟，避免过度显色导致絮状物(不影响结果)。

　　数据有效性‌：标准曲线R²值应≥0.95，样本复孔CV值≤10%。

　　安全操作‌：终止液含强酸，操作时佩戴防护装备;废弃物按生物危害处理。

　　七、性能参数‌

　　灵敏度‌：最低检测限≤3 pg/mL。

　　特异性‌：不与猪IL-1α、IL-6、TNF-α等交叉反应。

　　回收率‌：在80%-120%范围内。

　　批内/批间差‌：CV值均≤15%。

　　八、储存条件‌

　　未开封试剂盒：2-8℃保存，有效期见标签。

　　开封后微孔板：密封袋+干燥剂，2-8℃保存1个月。

　　避免冷冻浓缩洗涤液，结晶析出时37℃水浴溶解。

　　九、技术支持‌

　　实验问题咨询：提供样本类型、稀释倍数、标准曲线数据等详细信息。

　　数据异常处理：建议重复实验或更换新批次试剂盒。

　　注：以上仅供参考，本产品仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

　　猪白介素8(IL-8CXCL8)ELISA试剂盒实验使用说明书 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴!本生试剂盒