猪干扰素-γ(INF-γ)ELISA试剂盒实验使用说明书

    猪干扰素-γ(INF-γ)ELISA试剂盒实验使用说明书
    BS-8224  猪干扰素-γ(INF-γ)ELISA试剂盒
    一、实验目的
    本试剂盒用于体外定量检测猪血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清及相关液体样本中干扰素-γ（IFN-γ）的含量。
    二、实验原理
    采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法（ELISA）。微孔板包被有猪IFN-γ特异性捕获抗体，样本或标准品中的IFN-γ与捕获抗体结合，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经彻底洗涤后，加入底物TMB显色，TMB在HRP催化下转化为蓝色，酸终止后呈黄色。颜色的深浅与样本中IFN-γ浓度呈正相关，通过酶标仪在450nm波长测定吸光度（OD值），计算样本浓度。
    三、试剂盒组成
    预包被抗体的微孔板（96孔/48孔配置）
    标准品（S0-S5，浓度梯度：0、2.5、5、10、20、40pg/mL）
    HRP标记的检测抗体
    20×洗涤缓冲液
    底物TMB
    终止液
    样本稀释液
    封板膜
    说明书
    四、样本处理
    1.血清样本
    室温静置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟，取上清。
    避免溶血，溶血样本不宜检测。
    短期保存于2-8℃，长期保存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。
    2.血浆样本
    使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃、1000×g离心15分钟，取上清。
    保存同血清样本。
    3.组织匀浆
    用预冷PBS（0.01M，pH7.4）冲洗组织，去除血液，称重后剪碎。
    按1:9重量体积比加入PBS（可加蛋白酶抑制剂），冰上匀浆，超声破碎或反复冻融裂解。
    5000×g离心5-10分钟，取上清。
    4.细胞培养上清
    1000×g离心20分钟，取上清。
    保存同血清样本。
    五、操作步骤
    1.试剂准备
    洗涤缓冲液：蒸馏水按1:20稀释20×洗涤液，混匀备用。
    标准品稀释：按说明书梯度稀释，避免气泡。
    2.加样
    从铝箔袋取出平衡至室温的板条，设标准品孔、样本孔、空白孔。
    标准品孔加50μL不同浓度标准品，样本孔加10μL样本+40μL样本稀释液，空白孔不加。
    3.温育
    每孔加100μLHRP标记检测抗体，封板膜封住，37℃恒温箱温育60分钟。
    4.洗涤
    弃去液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟，甩干，吸水纸拍干，重复5次。
    5.显色与终止
    每孔加90μLTMB底物，37℃避光显色10-20分钟。
    加50μL终止液终止反应（蓝色变黄色），立即测定。
    6.测定
    酶标仪450nm波长测OD值。
    六、注意事项
    试剂保存‌：2-8℃避光保存，有效期6个月；使用前室温平衡20分钟。
    操作规范‌：
    避免酶标板干燥；加样和洗涤后尽快下一步操作。
    使用一次性枪头、EP管，防止交叉污染。
    浓缩试剂使用前离心，使管壁液体集中底部。
    样本要求‌：
    避免NaN3，因抑制HRP活性。
    样本稀释5倍，结果乘以5为实际浓度。
    质量控制‌：
    标准品和样本建议复孔检测。
    每次实验需做标准曲线。
    七、结果计算
    以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。样本OD值代入曲线计算浓度。
    八、技术要点
    充分混匀试剂，避免气泡；使用微量混匀器轻柔混匀。
    洗板时，手工洗板需彻底拍干；自动洗板机可设置浸泡程序或翻转微孔板。
    显色底物避光保存；终止液添加顺序与显色底物一致。
    猪干扰素-γ(INF-γ)ELISA试剂盒实验使用说明书本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴！本生试剂盒