猪促甲状腺激素(TSH)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　猪促甲状腺激素(TSH)ELISA试剂盒实验使用说明

　　BS-4659  猪促甲状腺激素(TSH)ELISA测试盒

　　实验步骤‌

　　实验前准备‌：

　　所有试剂和标本需缓慢恢复至室温(18-25℃)。

　　标准品(冻干品)用1mL标准品稀释液溶解，室温静置10分钟并颠倒混匀，得到10,000 pg/mL贮液。

　　用标准品稀释液将贮液稀释至50,000 pg/mL(最高浓度)，然后倍比稀释成7个浓度梯度(如5,000、2,500、1,250 pg/mL等)。

　　检测溶液A和B使用前需短暂离心或手甩，然后按1:100用检测稀释液稀释。

　　加样与孵育‌：

　　加样‌：取50μL标准品或样本加入微孔板，每孔加入50μL检测溶液A(HRP标记抗体)。

　　孵育‌：37℃孵育1小时(建议用湿盒防止蒸发)。

　　洗板‌：

　　洗板5次(每次静置1分钟，甩干拍干)，可用洗板机或手动操作。

　　显色与终止‌：

　　每孔加入50μL显色底物A和B，37℃避光孵育15分钟。

　　每孔加入50μL终止液，15分钟内用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值)。

　　数据分析‌：

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，计算线性回归方程。

　　将样本OD值代入方程计算TSH浓度。

　　关键注意事项‌

　　样品处理‌：血清/血浆用无热原无内毒素试管分离，避免反复冻融;组织匀浆需离心取上清。

　　试剂准备‌：所有试剂使用前恢复至室温;标准品工作液需现配现用;检测溶液稀释时按需配制并多配0.1-0.2mL。

　　操作规范‌：不同试剂使用不同移液槽;孵育时封好封板胶;显色底物避光保存‌。

　　安全提示‌：避免接触终止液和底物A/B，若接触立即用水冲洗;实验中禁止饮食、吸烟或使用化妆品。

　　常见问题与优化‌

　　样本浓度过高‌：用样本稀释液稀释后再测，确保OD值在标准曲线范围内。

　　显色异常‌：显色底物应为无色，加入后变蓝;终止液加入后变黄，绿色表示未混匀。

　　重复性差‌：确保加样量准确、洗板充分、孵育时间一致。

　　试剂盒性能与适用范围‌

　　检测范围‌：经检验，正常样本浓度在试剂盒提供的检测范围内，可直接取50μL样本上样‌。

　　适用样本‌：血清、血浆(EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞上清液、组织匀浆均可检测]。

　　注：供科研使用，以上资料供参考，不作为实验依据，具体请咨询技术老师或品牌商。

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