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技术资料/正文
53 人阅读发布时间:2025-12-18 11:35
小鼠凋亡因子BAX(BAX)ELISA试剂盒实验使用说明书
BS-9178 小鼠凋亡因子BAX(BAX)ELISA试剂盒
一、产品概述
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测小鼠样本中Bcl-2相关X蛋白(BAX)的浓度。BAX是调控细胞凋亡的关键蛋白,其表达水平与肿瘤、神经退行性疾病等病理过程密切相关。
二、实验原理
捕获抗体包被:抗小鼠BAX单克隆抗体预包被于微孔板。
样本孵育:样本中的BAX与捕获抗体结合。
检测抗体反应:辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体与BAX结合形成夹心复合物。
显色反应:加入TMB底物显色,颜色深浅与BAX浓度成正比。
三、试剂盒组成
组分规格保存条件
预包被微孔板96孔/48孔2-8℃密封冷藏
BAX标准品6管2-8℃冷藏
HRP标记检测抗体6mL2-8℃避光冷藏
显色剂A(TMB)6mL2-8℃避光保存
显色剂B(终止液)6mL2-8℃冷藏
浓缩洗涤液20mL2-8℃(需稀释)
四、样本要求
样本类型:血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆。
处理建议:
细胞样本:离心后取上清,避免反复冻融。
组织样本:按1:9(w/v)加入PBS匀浆后离心取上清。
保存:短期(≤7天)2-8℃保存,长期需-80℃冻存。
五、实验步骤
1.试剂准备
洗涤液:浓缩液用蒸馏水按1:19稀释。
标准品梯度:用样本稀释液配制0-1000pg/mL系列浓度。
2.操作流程
每孔加入100μL标准品/样本,37℃孵育90分钟。
弃去液体,拍干,每孔加满洗涤液洗涤3次。
每孔加入100μLHRP标记抗体,37℃孵育60分钟。
重复洗涤步骤。
每孔加入90μLTMB显色液,避光室温孵育15分钟。
每孔加入50μL终止液,立即测定OD值。
六、数据分析
标准曲线:以标准品浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制四参数拟合曲线。
样本计算:根据标准曲线方程计算样本浓度,建议稀释后复测。
七、注意事项
避免使用溶血或脂血样本。
洗涤需彻底,残留液体影响精度。
显色液需避光保存,变蓝后不可使用。
不同批号试剂不可混用。
八、性能参数
灵敏度:≤5pg/mL
检测范围:15-1000pg/mL
重复性:CV<10%
特异性:不与小鼠BCL-2、BCL-XL交叉反应。
九、常见问题解答
Q1:标准曲线线性不佳?
A:检查稀释步骤,确保标准品充分混匀。
Q2:OD值偏低?
A:确认孵育时间,避免洗涤过度。
注:以上仅供参考,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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