人GABA转运体1(GAT1)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　人GABA转运体1(GAT1)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-9752人GABA转运体1(GAT1)ELISA试剂盒

　　一、检测原理

　　本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)技术。 预先包被抗人GAT1抗体的微孔板中，依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体，经温育洗涤后，通过TMB底物显色反应，颜色深浅与样本中GAT1浓度呈正相关。 最终在450nm波长下测定吸光度(OD值)并计算浓度。

　　二、试剂盒组成

　　预包被抗体的微孔板(96孔)

　　标准品(S0-S5，浓度梯度：0、0.5、1、2、4、8μmol/L)

　　HRP标记的检测抗体

　　20×洗涤缓冲液

　　TMB底物溶液

　　终止液(硫酸溶液)

　　样本稀释液

　　封板膜

　　三、自备物品

　　酶标仪(450nm波长)

　　高精度移液器及枪头(0.5-10μL、2-20μL、20-200μL、200-1000μL)

　　37℃恒温箱

　　洗瓶或自动洗板机

　　蒸馏水

　　吸水纸

　　四、样本收集与处理

　　1. 血清样本

　　使用无热原/内毒素试管采集血液，避免溶血。

　　室温静置30分钟，3000×g离心10分钟，取上清液。

　　保存：短期(≤24小时)4℃;长期需分装冻存于-20℃(避免反复冻融)。

　　2. 血浆样本

　　使用EDTA/肝素抗凝管采集，立即混匀。

　　3000×g离心30分钟，取上清液。

　　保存同血清样本。

　　3. 细胞上清液

　　3000×g离心10分钟，去除颗粒物。

　　取上清液检测。

　　4. 组织匀浆

　　组织块加入生理盐水(1:9 w/v)机械匀浆。

　　3000×g离心10分钟，取上清液。

　　五、操作步骤

　　1. 试剂准备

　　洗涤液：20×浓缩液按1:19用蒸馏水稀释(如10mL浓缩液+190mL蒸馏水)。

　　标准品梯度稀释：按说明书稀释S1-S5标准品。

　　2. 加样与温育

　　设空白孔(S0)、标准孔、样本孔，每孔加稀释样本100μL。

　　加入HRP标记检测抗体50μL/孔(标准品孔除外)。

　　37℃避光温育30分钟。

　　3. 洗涤

　　手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩干，重复5次。

　　自动洗板：每孔注入350μL洗涤液，浸泡1分钟，洗板5次。

　　4. 显色与终止

　　每孔加TMB底物90μL，37℃避光显色15分钟。

　　每孔加终止液50μL终止反应(蓝色变黄色)。

　　5. 测定

　　30分钟内于450nm波长测定OD值。

　　六、结果计算

　　以标准品浓度(μmol/L)为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。

　　样本OD值代入曲线方程计算浓度，乘以稀释倍数(如样本稀释5倍，结果×5)。

　　七、注意事项

　　试剂盒保存于2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

　　浓缩洗涤液结晶属正常现象，水浴加热溶解后使用。

　　避免样本溶血、反复冻融。

　　严格控制温育时间、洗涤次数及加样顺序。

　　显色液变蓝后立即终止反应。

　　八、性能指标

　　灵敏度：≤0.1μmol/L

　　检测范围：0.5-8μmol/L

　　精密度：批内变异系数≤10%，批间≤15%

　　特异性：不与GAT2、GAT3等交叉反应

　　九、有效期

　　6个月(2-8℃密封保存)

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

　　人GABA转运体1(GAT1)ELISA试剂盒实验使用说明书 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴!