本生阐述：LB培养基的制备

　　本生阐述：LB培养基的制备
 

　　LB培养基的配方如下：

　　酵母提取物 5g

　　蛋白胨 10g

　　NaCl 5g

　　琼脂 15～20g

　　水 1000mL

　　pH 7.4～7.6

　　使用器材：

　　酵母提取物，蛋白胨， NaCl，琼脂;

　　1mol/L NaOH， 1mol/L HCl;

　　试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸(pH 5.5～9.0)，棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。

　　LB培养基操作步骤：

　　1.称量

　　按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。

　　2.溶化

　　在 上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品*溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称 好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。zui后补足所失的水分。

　　3.调pH

　　在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。

　　对于有些要求pH值较的微生物，其pH的调节可用酸度计进行(使用方法，可参考有关说明书)。

　　4.分装

　　按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。

　　(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。

　　(2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

　　(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

　　5.加塞

　　培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。

　　6.包扎

　　加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

　　7.灭菌

　　将上述培养基以1.05kg/cm2(15磅/英寸2)，121.3℃，20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。

　　8.搁置斜面

　　将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

　　9.无菌检查

　　将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48小时，以检查灭菌是否

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