技术文章：碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)

　　碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)

　　产品简介：

　　碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性最适pH9.2~9.8。

　　碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)(AlkalinePhosphataseColorimetricAccayKit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离的酚和磷酸。通过分光光度比色法测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以算出碱性磷酸酶的活性。该试剂盒用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血液、血清等样品中内源性的碱性磷酸酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

产品名称	KE001-50T	KE001-100T	Storage
试剂(A):ALPAssaybuffer	25ml	50ml	4℃避光
试剂(B):ALP显色液	25ml	50ml	-20℃避光
试剂(C):显色基液	75ml	150ml	-20℃避光
试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)	1ml	2ml	RT
试剂(E):ddH2O	5ml	10ml	RT
说明书	一份

储存条件：

4℃，三个月有效。

操作步骤（仅供参考）：

1、配制标准品工作液：按照下表稀释系列标准品溶液。

	0	1	2	3	4	5
Phenol(0.05mg/ml)(ml)	0	0.1	0.2	0.3	0.4	0.5
ddH2O(ml)	0.55	0.45	0.35	0.25	0.15	0.05
相当于金氏单位(U/L)	0	10	20	30	40	50

 

     2、准备样品：①细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。③高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。

3、加样：按照下表设置对照管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的碱性磷酸酯酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行管。

加入物ml	对照孔	标准孔	测定孔
Phenol标准（1-5号管）		0.55
待测样品			0.55
ALPAssaybuffer	0.50	0.50	0.50

37℃水浴中孵育5min

ALP显色液（37℃提前孵温）

0.50

0.50

0.50

立即混匀，37℃水浴中准确孵育5min

显色基液	1.50	1.50	1.50
待测样品	0.55

       4、用分光光度计，以0号管(ddH2O)调零，读取对照管、标准管、测定管的510nm吸光(即A对照、A标准、A测定)，如无法检测510nm，亦可检测500～530nm范围内吸光，一般应数小时内检测完毕。

计算结果：

以系列Phenol标准(1～5号管)对应的金氏单位为x轴，以相应的A(1～5号管)为y轴，A测定-A对照的差值为实际的吸光度，用该差值与标准曲线进行对比，求出酶活力单位。

参考区间（37℃）：

1、健康成年人：3～13金氏单位。

2、健康儿童：5～28金氏单位。

注意事项：

1、 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。

3、所测样本的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。

4、空白管如果显红色，说明ALP显色液不可用，应丢弃。

5、加入显色基液时，应迅速，并且及时混匀，否则显色不充分。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

7、本产品仅供科研使用，严禁它用。

 

　　碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。本生移液器吸头