改良Lowry法蛋白定量试剂盒文章资料

改良Lowry法蛋白定量试剂盒

 

产品简介：

目上常用的蛋白浓度检测方法是：BCA蛋白定量试剂盒(BCAProteinAssayKit)和Bradford蛋白定量试剂盒(BradfordProteinAssayKit)。改良Lowry法蛋白定量试剂盒是利用蛋白中肽键与铜离子结合成四配位基铜离子复合物，后者与Folin试剂(福林酚)反应，产生蓝色比色物，用分光光度法(酶标仪或分光光度计)检测750nm处吸光度，并与标准曲线比较，求得待测蛋白样品的浓度，在1～1500μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。

组成：

产品名称		PD003-500T	PD003-1000T	Storage
试剂(A):Folin-CiocalteuReagent		5ml	10ml	RT避光
试剂(B):改良LowryReagent	B1:LowryA	100ml	2×100ml	RT
	B2:LowryB	2ml	4ml	RT
	B3:LowryC	2ml	4ml	RT
临用，按LowryA:B:C=50:1:1比例配制改良LowryReagent，即配即用。
试剂(C):蛋白标准(BSA，10mg/ml)		1ml×2	4ml		-20°C
试剂(D):蛋白标准稀释液		2ml	4ml		RT
说明书		一份

根据样品数量按照试剂(A):Folin-CiocalteuReagent：ddH2O=1:1的比例配制工作液现配现用

储存条件：

12个月有效。

 

改良Lowry法蛋白定量试剂盒 操作步骤（仅供参考）：

1、取适量10mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为1500μg/ml或所需浓度。如取150μl 10mg/ml蛋白标准，加入850μl稀释液，充分混匀，即配制1500μg/ml蛋白标准。

2、根据样品数量，按试剂(B1):试剂(B2):试剂(B3)=50:1:1的比例配制改良LowryReagent工作液，充分混匀。

3、将1500μg/ml蛋白标准用稀释待测样品的溶液5倍梯度稀释，浓度分别为300μg/ml、60μg/ml、12.5μg/ml、2.5μg/ml、0μg/ml，各取40μl加到96孔板的标准品孔。

4、加待测蛋白样品或稀释液(空白对照)到96孔板的样品孔中，如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液不同，应在待测蛋白样本孔中加入40μl稀释液；如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液相同，无需在待测蛋白样本孔中加入40μl稀释液。

5、用多通道微量移液器快速将200μl配置好的改良LowryReagent工作液加入至各孔，立即在96孔板混匀器上混匀30s或手动轻轻混匀。室温准确孵育。

6、用多通道微量移液器快速将20μl新鲜配置的Folin-Ciocalteu工作液加至上述各孔中，立即在96孔板混匀器上混匀30s或手动轻轻混匀30s。

7、轻轻混匀96孔板，酶标仪或微量滴定板读数仪测定750nm处吸光度，也可用分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的小检测体积，检测样品数量亦相应减少。

 

注意事项：

1、蛋白标准原液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃保存。

2、待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。

3、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的小检测体积。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

5、本产品仅供科研使用，严禁它用。

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