抗性淀粉检测试剂盒(微量法100T/96S) 产品详解

　　抗性淀粉检测试剂盒(微量法100T/96S)

　　抗性淀粉(RS)是指在人小肠内不能被酶解的淀粉，在大肠部分或完全发酵。RS 是总膳食纤维的组分之一。

　　抗性淀粉的测定方法： 样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶(AMG)37℃振荡水浴孵育 16 小时，在这期间，通过两种酶的联合作用，非抗性淀粉被溶解，水解成 D-葡萄糖，孵育结束后，加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精(IMS,bianxing乙醇)终止反应。离心上述溶液，收集上清勿弃，底部残留絮状团即为样品中的 RS，用含水的 IMS 或乙醇(50%v/v)洗涤絮状团，洗涤后离心，再重复一次洗涤离心，收集离心后获得的上清，与之前收集的上清混合。小心倒出试管残留的液体，将絮状团置于冰水浴中，加入 2M KOH 溶解，溶解的同时用磁力搅拌机剧烈搅拌。用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性，用 AMG 将淀粉定量水解成葡萄糖。D-葡萄糖用葡糖yanghua酶/过yanghua物酶试剂(GOPOD)测定，这也是对样品中 RS 含量的测定。非抗性淀粉(可溶性淀粉)的测定可通过集中的上清液并定容至 100mL，再用 GOPOD 测定 D-葡萄糖完成。

　　应用性和精确性

　　这个方法需要样品中 RS 含量多于 2% w/w，如 RS 含量多于 2% w/w，常规标准误差为±5%，少于 2% w/w RS的误差更高。

　　试剂盒组成与配制

　　试剂名称 储存条件 注意事项

　　试剂一 -20℃ 粉剂 5ml×1 瓶

　　试剂二 -20℃ 粉剂 5g×1 瓶

　　试剂三 4℃ 液体 500ml×1 瓶

　　试剂四 -20℃ 粉剂 mg×1 瓶

　　标准品 4℃ 液体 5mL×1 瓶 D-葡萄糖标准溶液(5 mL，1.0 mg/mL)

　　注意事项：

　　用之前可分为适当大小的等分试样，并在使用期间储存在-10℃以下的聚丙烯管中，如有可能，在使用过程中保持冷却。(未配制时在-20℃稳定 2 年以上，配制使用后在-20℃稳定 1~3 个月)

　　用 100mL 顺丁烯二酸钠缓冲液(100mM，pH6.0)悬浮 1g试剂二中的产品，搅拌 5 分钟。加入 1.0mL 稀释后试剂一(过程见：溶液/悬浮液的制备)，混匀，>1500g 离心 10 分钟，慢慢倒出上清液，这就是制备的试剂二。(试剂二制备后应当天使用)

　　用 20mL 试剂三缓冲液溶解试剂四中的内容物，并将其定量转移到含有剩余试剂三缓冲液的瓶子中。用铝箔盖住这个瓶子，以保护密封的试剂不受光照，此试剂为GOPOD 试剂。(未配制时在 2-5℃或<-10℃下存放超过12 个月，配制使用后在 2-5℃或<-20℃可稳定 1~3 个月)

　　备注：如果该试剂要以冷冻状态储存，则最好将其分为200 mL 的小份，在使用过程中仅冷冻/解冻一次。新制备试剂时，其颜色可能为浅黄色或浅粉色。在 4°C下，2-3 个月后，若该溶液将呈现出更强烈的粉红色应立即对照蒸馏水读数，吸光度应小于 0.05，若大于此数值，则表示该溶液不可再使用。

　　注：可根据实验过程中的使用量适量配制

　　溶液/悬浮液的制备

　　使用瓶子 1 中提供的的产品(试剂一)，这个溶液是有粘性的，因此应使用移液器移取分装。(4℃下稳定性> 3 年)稀释后试剂一：取 2 mL 瓶子 1 中溶液用 100m pH6.0 顺丁烯二酸钠缓冲液稀释至 22mL。(注：以5 mL 为单位分装后用聚xi管冷冻保存，反复冻融不会影响稳定性，稳定性-20℃ >5 年)没有提供的试剂(应购买分析纯级)

　　1.顺丁烯二酸钠(马来酸钠)缓冲液(100mM，pH6.0)加上 2mM 二水氯化钙和diedan化钠(0.02%w/v)：用 1600mL蒸馏水溶解 23.2g 顺丁烯二酸，用 4M(160g/L)氢yanghua钠调节 pH 至 6.0，加入 0.6g 二水氯化钙和 0.4gdiedan钠，混合并溶解，定容至 2L。(4℃下可保存一年)

　　2.醋酸钠缓冲液(1.2M，PH3.8)：将 69.6mL 的冰c酸(1.05g/mL)加至 800 mL 的蒸馏水中，用 4M 氢yanghua钠调节 pH 至 pH3.8，用蒸馏水定容至 1L。(室温下可保存一年)

　　3.醋酸钠缓冲液(100mM，PH4.5)：将 5.8mL 的冰c酸加至 900 mL 的蒸馏水中，用 4M 氢yanghua钠调节 pH 至4.5，用蒸馏水定容至 1L。(4℃保存 2 个月)
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