大鼠白介素18(IL-18)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　大鼠白介素18(IL-18)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-3070大鼠白介素18(IL-18)ELISA试剂盒

　　一、产品简介

　　本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)技术，专用于体外定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清液及组织匀浆样本中的IL-18浓度。IL-18是一种分子量约18.4 kDa的促炎症细胞因子，参与免疫调节和Th1型细胞活化，与自身免疫性疾病、感染及肿瘤预后相关。

　　检测范围‌：15.6 pg/mL～1000 pg/mL

　　灵敏度‌：<1 pg/mL

　　特异性‌：与大鼠IL-18特异性结合，无交叉反应。

　　二、试剂盒组分

　　组分 规格 数量

　　预包被抗大鼠IL-18抗体的96孔板 96孔/板 1板

　　重组大鼠IL-18标准品(冻干) 10 ng/管 2管

　　生物素标记抗大鼠IL-18抗体(100×) 100 μL 1管

　　亲和素-过氧化物酶复合物(ABC，100×) 100 μL 1管

　　样品稀释液 30 mL 1瓶

　　抗体稀释液 12 mL 1瓶

　　ABC稀释液 12 mL 1瓶

　　TMB显色液 10 mL 1瓶

　　终止液 10 mL 1瓶

　　洗涤缓冲液(25×) 20 mL 1瓶

　　封板膜 - 4张

　　三、储存条件

　　未开封试剂盒：2～8℃避光保存，有效期6个月。

　　开封后：标准品和抗体建议分装冻存(-20℃)，避免反复冻融;其他组分2～8℃保存。

　　四、实验步骤

　　1. 样本准备

　　血清/血浆‌：室温静置10-20分钟，2000-3000 rpm离心20分钟，取上清。避免溶血。

　　细胞培养上清‌：离心去除细胞碎片，立即检测或-80℃保存。

　　组织匀浆‌：用PBS匀浆后离心取上清。

　　2. 试剂准备

　　标准品稀释‌：用样品稀释液将冻干标准品复溶至1000 pg/mL，梯度稀释至15.6 pg/mL。

　　生物素标记抗体工作液‌：按1:99比例稀释(如1 μL抗体+99 μL抗体稀释液)。

　　ABC工作液‌：按1:99比例稀释(如1 μL ABC+99 μL ABC稀释液)。

　　3. 操作流程

　　加样‌：每孔加入100 μL标准品或样本，零孔加样品稀释液。

　　孵育‌：37℃避光孵育90分钟，洗板3次(每次浸泡1-2分钟)。

　　加抗体‌：每孔加入100 μL生物素标记抗体工作液，37℃孵育60分钟，洗板3次。

　　加ABC‌：每孔加入100 μL ABC工作液，37℃孵育30分钟，洗板5次。

　　显色‌：每孔加入90 μL TMB显色液，避光室温孵育10-15分钟。

　　终止‌：每孔加入50 μL终止液，混匀后30分钟内测OD值。

　　4. 结果计算

　　以标准品浓度(pg/mL)为横坐标，OD450值为纵坐标，绘制标准曲线。

　　根据样本OD值，通过标准曲线计算IL-18浓度。

　　五、注意事项

　　操作规范‌：避免气泡产生，加样时枪头贴壁缓慢加入。

　　洗涤‌：彻底洗涤以降低背景值，但避免过度干燥导致孔间差异。

　　试剂有效期‌：使用前检查组分是否在有效期内，避免混用不同批次试剂。

　　安全提示‌：TMB显色液和终止液具腐蚀性，需佩戴手套操作。

　　六、常见问题分析

　　问题现象 可能原因 解决方案

　　标准曲线线性差 标准品稀释错误或污染 重新配制标准品，使用新鲜稀释液

　　背景值过高 洗涤不充分或ABC过量 增加洗涤次数，优化ABC稀释比例

　　显色过浅或无信号 抗体失活或孵育时间不足 检查抗体储存条件，延长孵育时间

　　注：本产品仅供科研使用，不作为实验依据。具体操作请以实际试剂盒说明书为准。

　　大鼠白介素18(IL-18)ELISA试剂盒实验使用说明书 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。 本生试剂盒