人血小板衍生生长因子(PDGF-BB)ELISA试剂盒实验使用说明书

    人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒实验使用说明书

    BS-0130人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒
    一、实验目的
    本试剂盒采用双抗体夹心法，用于定量检测人血清、血浆、组织匀浆及细胞培养上清液中PDGF的浓度，适用于科研用途，不用于临床诊断。
    二、实验原理
    通过固相抗体包被微孔板捕获样本中的PDGF，加入生物素标记的检测抗体形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物，经洗涤后加入TMB显色底物。显色深浅与样本中PDGF浓度呈正相关，通过酶标仪在450nm波长测定吸光度，结合标准曲线计算含量。
    三、试剂盒组成
    预包被酶标板‌：96孔（8×12条）或48孔（8×6条）
    标准品‌：冻干粉（2000pg/mL），需用标准品稀释液复溶
    生物素化检测抗体‌：100×浓缩液
    酶结合物（SABC）‌：100×浓缩液
    TMB显色液‌：A/B液各6mL（96孔配置）
    终止液‌：6mL（96孔配置）
    20×浓缩洗涤液‌：60mL（96孔配置）
    封板胶纸‌：4张（96孔配置）
    说明书‌：1份
    四、自备试剂与器材
    仪器‌：酶标仪（450nm滤光片）、37℃恒温箱、微量移液器（0.5-1000μL）
    耗材‌：无热原离心管、一次性吸头
    试剂‌：蒸馏水或去离子水
    五、样本处理
    1.血清样本
    室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000转/分离心20分钟。
    收集上清，避免溶血或高血脂样本。短期保存于2-8℃（≤48小时），长期需分装冻存于-20℃（≤1个月）或-80℃（≤3个月），避免反复冻融。
    2.血浆样本
    使用EDTA、柠檬酸钠或肝素抗凝，混合10-20分钟后离心。
    处理同血清样本，注意抗凝剂选择需与检测要求一致。
    3.细胞培养上清
    离心去除细胞碎片，收集上清液。
    若检测细胞内成分，需用PBS（pH7.2-7.4）裂解细胞后离心。
    4.稀释方法（高浓度样本）
    100倍稀释‌：5μL样本+495μL稀释液。
    1000倍稀释‌：两步法（5μL样本→95μL稀释液，混匀后取5μL→245μL稀释液）。
    六、实验步骤
    1.试剂准备
    回温‌：所有试剂及样本于室温平衡30分钟。浓缩洗涤液如有结晶，37℃水浴溶解。
    洗涤液配制‌：20×浓缩液用蒸馏水稀释20倍（如1mL浓缩液+19mL水）。
    标准品梯度稀释‌：
    复溶冻干标准品（2000pg/mL）。
    按2倍稀释法配制梯度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/mL。
    2.加样与孵育
    每孔加入100μL标准品或样本（零孔加稀释液），封板膜覆盖，37℃孵育90分钟。
    洗涤3次（每孔300μL洗涤液，浸泡1分钟/次）。
    每孔加入100μL生物素化抗体工作液（1:100稀释），37℃孵育60分钟。
    洗涤3次。
    每孔加入100μL酶结合物工作液（1:100稀释），37℃孵育30分钟。
    洗涤5次。
    3.显色与终止
    每孔加入90μLTMB显色液，37℃避光反应15-20分钟（显色梯度肉眼可见）。
    每孔加入50μL终止液，溶液变黄。
    4.测定
    酶标仪450nm波长测定吸光度（OD值），以零孔调零。
    绘制标准曲线，计算样本浓度。
    七、注意事项
    安全防护‌：操作血液或体液样本时穿戴实验服及手套，符合生物安全规范。
    试剂保存‌：未使用试剂按说明书温度保存，避免反复冻融浓缩液。
    样本质量‌：避免溶血、脂血或反复冻融，悬浮物需离心去除。
    稀释验证‌：高浓度样本需预实验确定稀释倍数，确保结果在检测范围内。
    仪器校准‌：酶标仪滤光片波长需为450±2nm，使用前预热15分钟。
    八、结果计算
    以标准品浓度为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴），拟合四参数逻辑曲线。样本浓度通过曲线方程计算，若样本稀释需乘以稀释倍数。
    九、有效期与储存
    有效期‌：详见试剂盒标签。
    储存条件‌：2-8℃避光保存，浓缩洗涤液结晶后37℃溶解。
    注意：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
    人血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒实验使用说明书本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴！