绵羊Ⅲ型胶原α1链(COL1A3)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　绵羊Ⅲ型胶原α1链(COL1A3)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　一、实验目的

　　本试剂盒用于定量测定绵羊血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中Ⅲ型胶原α1链(COL1A3)的浓度。实验采用双抗体夹心法，确保检测的准确性和特异性‌。

　　二、实验原理

　　抗体包被‌：将抗COL1A3抗体包被于微孔板，形成固相抗体‌。

　　抗原结合‌：样本中的COL1A3与固相抗体结合，形成抗体-抗原复合物‌。

　　酶标记检测‌：加入生物素化的抗COL1A3抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物‌。

　　显色反应‌：加入TMB底物，显色后终止反应，颜色深浅与COL1A3浓度呈正相关‌。

　　定量分析‌：在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样本浓度‌。

　　三、试剂盒组成

　　组分 规格(48孔) 规格(96孔) 保存条件

　　预包被酶标板 8×6条 8×12条 2-8℃

　　标准品 1支 1支 -20℃

　　标准品/样品稀释液 10ml 15ml 2-8℃

　　生物素化检测抗体 60μl 120μl 2-8℃

　　生物素化抗体稀释液 6ml 12ml 2-8℃

　　SABC复合物 6ml 12ml 2-8℃

　　TMB显色液(A/B) 各3ml 各6ml 避光2-8℃

　　终止液 6ml 12ml 2-8℃

　　20×浓缩洗涤液 30ml 60ml 室温

　　封板胶纸 2张 4张 室温

　　说明书 1份 1份 —

　　四、样本处理

　　血清/血浆‌：

　　采集：使用无热原、无内毒素试管，避免溶血或高血脂样本‌。

　　保存：2-8℃可保存48小时，长期需冷冻(-20℃或-80℃)，避免反复冻融‌。

　　组织匀浆‌：

　　称取组织加入PBS(pH 7.4)，匀浆后离心取上清‌。

　　细胞培养上清‌：

　　离心去除悬浮物，上清直接检测或分装保存‌。

　　五、操作步骤

　　洗涤液配制‌：用蒸馏水1:20稀释浓缩洗涤液(如1ml浓缩液+19ml蒸馏水)‌。

　　标准品稀释‌：取7管标注浓度梯度(如40ng/mL至0ng/mL)，每管加入200μL稀释液，依次稀释混匀‌。

　　加样‌：

　　每孔加入100μL标准品或样本，37℃温育2小时‌。

　　洗涤5次，拍干。

　　酶标反应‌：

　　加入生物素化抗体(1:100稀释)，37℃温育1小时‌。

　　洗涤后加入SABC复合物，37℃温育30分钟‌。

　　显色与终止‌：

　　加入TMB显色液(A/B等量混合)，避光显色15-20分钟‌。

　　加入终止液终止反应，立即测定OD值‌。

　　六、注意事项

　　安全操作‌：

　　避免直接接触终止液和底物，如接触需立即用水冲洗‌。

　　使用一次性吸头防止交叉污染，避免金属部分接触试剂‌。

　　试剂保存‌：

　　标准品稀释后需丢弃，不可保存‌。

　　底物B避光保存，避免长时间暴露‌。

　　实验条件‌：

　　温育时间需一致，确保孔间温度均衡‌。

　　洗涤时充分拍干，避免吸水纸直接接触孔内液体‌。

　　七、结果分析

　　标准曲线‌：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制曲线‌。

　　样本浓度‌：根据样本OD值代入标准曲线计算浓度‌。

　　八、质量控制

　　精度‌：板内CV<10%，板间CV<10%‌。

　　灵敏度‌：检测范围0.625-40ng/mL，确保低浓度样本可测‌。

　　特异性‌：交叉反应测试验证目标蛋白的专一性‌。

　　九、保存与有效期

　　未开封试剂盒：2-8℃保存，有效期6个月‌。

　　开封后：按组分要求分装保存，避免反复冻融‌。

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

　　绵羊Ⅲ型胶原α1链(COL1A3)ELISA试剂盒实验使用说明书 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。本生试剂盒