小鼠脂肪酸合成酶(FAS)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　小鼠脂肪酸合成酶(FAS)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　一、实验目的

　　本试剂盒用于定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中脂肪酸合成酶(FAS)的含量。

　　二、实验原理

　　采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)：

　　用纯化的小鼠FAS抗体包被微孔板制成固相抗体

　　依次加入样本、标准品、HRP标记的检测抗体形成抗体-抗原-酶标抗体复合物

　　经彻底洗涤后加底物TMB显色，颜色深浅与样品中FAS含量呈正相关

　　用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品浓度

　　三、试剂盒组成

　　组分规格(48T)规格(96T)保存条件

　　预包被酶标板8×6条8×12条4℃保存

　　标准品1支1支-20℃保存

　　标准品稀释液10ml15ml4℃保存

　　生物素化抗体60μl(100×)120μl(100×)-20℃保存

　　抗体稀释液6ml12ml4℃保存

　　SABC复合物6ml12ml4℃保存

　　TMB显色液各3ml(A/B)各6ml(A/B)4℃避光保存

　　终止液6ml12ml室温保存

　　20×洗涤液30ml60ml室温保存

　　四、样本处理

　　血清：收集于血清分离管，室温放置2小时或4℃过夜，1000×g离心20分钟取上清

　　血浆：使用EDTA/肝素抗凝，3000转离心30分钟取上清

　　组织匀浆：加入适量生理盐水捣碎，3000转离心10分钟取上清

　　保存：短期(2-8℃)保存不超过48小时，长期需冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融

　　五、操作步骤

　　试剂准备：

　　洗涤液：用蒸馏水1:20稀释浓缩洗涤液

　　标准品：按说明书进行梯度稀释

　　生物素化抗体：临用前用抗体稀释液稀释

　　加样：

　　设置空白孔、标准孔、待测样品孔

　　每孔加入标准品/样本100μl

　　37℃温育90分钟^^1^^

　　洗涤：

　　甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液

　　静置1分钟后甩尽，重复5次

　　在吸水纸上拍干^^4^^

　　显色：

　　每孔加入生物素化抗体工作液100μl

　　37℃温育60分钟

　　洗涤后每孔加入底物溶液90μl

　　37℃避光显色15-20分钟

　　终止：

　　每孔加入终止液50μl

　　立即在450nm波长测定OD值

　　六、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线

　　根据样品OD值在标准曲线上读出对应浓度

　　若样品稀释过，结果需乘以稀释倍数

　　七、注意事项

　　试剂盒保存于2-8℃，使用前室温平衡20分钟

　　不同批号试剂请勿混用

　　洗涤不充分会导致假阳性或假阴性结果

　　显色液应现配现用，避免光照

　　终止液具有腐蚀性，避免接触皮肤和眼睛

　　八、预期结果

　　标准曲线相关系数R²应≥0.95

　　批内变异系数(CV)<10%，批间CV<15%

　　灵敏度通常可达0.156-10ng/mL

　　小鼠脂肪酸合成酶(FAS)ELISA试剂盒实验使用说明书 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴!本生试剂盒