人白介素1(IL-1)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　人白介素1(IL-1)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-0177 人白介素1(IL-1)ELISA试剂盒

　　一、检测原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。将抗IL-1抗体包被于微孔板，依次加入样本、标准品及酶标记抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经彻底洗涤后，加入底物TMB显色，TMB在过氧化物酶催化下转化为蓝色，并在酸作用下转为黄色。颜色深浅与样本中IL-1浓度呈正相关，通过酶标仪测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。

　　二、试剂盒组成

　　名称 96孔配置 48孔配置 保存条件

　　微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条 2-8℃

　　标准品 0.3mL×6管 0.3mL×6管 2-8℃

　　样本稀释液 6mL 3mL 2-8℃

　　检测抗体-HRP 10mL 5mL 2-8℃

　　20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 2-8℃

　　底物A(TMB) 6mL 3mL 2-8℃避光

　　底物B(显色终止液) 6mL 3mL 2-8℃

　　封板膜 2张 2张 -

　　说明书 1份 1份 -

　　三、样本收集与处理

　　1. 血清样本

　　使用无热原试管收集血液，室温静置10-20分钟，3000×g离心10分钟分离血清。

　　避免溶血，及时分装并冻存于-20℃(短期)或-80℃(长期)，避免反复冻融。

　　2. 血浆样本

　　选择EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝，混合后3000×g离心20分钟取上清。

　　处理同血清样本。

　　3. 细胞培养上清

　　3000×g离心10分钟去除颗粒，取上清检测。

　　4. 组织匀浆

　　组织加入生理盐水捣碎，3000×g离心10分钟取上清。

　　四、实验步骤

　　1. 试剂准备

　　提前20分钟将试剂盒平衡至室温(18-25℃)。

　　洗涤液配制：用双蒸水将20×浓缩洗涤液稀释为1×工作液(如25mL浓缩液+475mL水)。

　　2. 标准品稀释

　　冻干标准品加入1mL标准品稀释液，静置15分钟溶解，配成高浓度母液。

　　梯度稀释(示例)：取7支EP管，每管加500μL稀释液，从母液转移500μL至第一管混匀，依次倍比稀释至目标浓度(如1000→500→250→125→62.5→31.25→15.625 pg/mL)。

　　3. 加样与温育

　　每孔加入100μL标准品或样本(建议做复孔)。

　　37℃避光温育90分钟，封板膜密封。

　　4. 洗涤

　　甩尽孔内液体，用1×洗涤液洗涤3次，每次浸泡1分钟，拍干。

　　5. 显色与终止

　　每孔加入100μL TMB底物(A:B=1:1混合)，37℃避光反应15-20分钟。

　　加入50μL终止液终止反应，溶液由蓝变黄。

　　6. 测定

　　30分钟内用酶标仪测定450nm波长OD值。

　　五、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。

　　根据样本OD值，通过回归方程计算实际浓度(若样本稀释，需乘以稀释倍数)。

　　六、注意事项

　　试剂保存‌：未使用板条需密封保存于2-8℃，避免受潮。

　　样本处理‌：避免使用溶血、高血脂样本;高浓度样本需预实验确定稀释倍数。

　　操作规范‌：

　　加样时避免气泡，枪头需更换。

　　温育时间严格控制在规定范围内，避免蒸发。

　　质量控制‌：每批次实验需设空白孔(S0)及阴性对照。

　　安全提示‌：终止液含酸，需戴手套操作;废弃物按生物危害处理。

　　七、性能指标

　　灵敏度‌：通常≤1.0 pg/mL。

　　检测范围‌：典型范围为3.9–250 pg/mL(具体以说明书为准)。

　　八、有效期

　　试剂盒在2-8℃下有效期为6个月。

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