小鼠Toll样受体9(TLR-9CD289)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　小鼠Toll样受体9(TLR-9CD289)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-2243小鼠Toll样受体9(TLR-9/CD289)ELISA试剂盒

　　一、产品概述

　　本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠TLR-9/CD289蛋白浓度。TLR-9是Toll样受体家族成员，在天然免疫应答中识别病原体DNA并激活炎症信号通路。试剂盒包含预包被抗体、酶标记物、标准品及配套试剂，适用于血清、血浆或细胞培养上清液样本。

　　二、实验原理

　　包被抗体‌：微孔板孔内预包抗小鼠TLR-9单克隆抗体。

　　抗原结合‌：样本中TLR-9与包被抗体结合，形成固相抗原-抗体复合物。

　　酶标记‌：加入生物素标记的二抗，与抗原结合。

　　显色反应‌：加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素，通过TMB底物显色。

　　定量分析‌：颜色深浅与样本中TLR-9浓度成正比，用酶标仪测定450nm吸光度值。

　　三、试剂盒组成

　　组分 规格 储存条件

　　预包被微孔板 96孔/48孔 2-8℃避光保存

　　标准品(冻干) 2支 -20℃长期保存

　　酶标记物(浓缩) 1瓶 -20℃避光保存

　　TMB显色液 1瓶 2-8℃避光保存

　　终止液 1瓶 室温避光保存

　　洗涤液(20×) 1瓶 室温保存

　　样本稀释液 1瓶 室温保存

　　四、样本处理

　　血清/血浆‌：采集后室温静置30分钟，4℃离心(3000rpm，10分钟)，取上清液-80℃保存，避免反复冻融。

　　细胞上清‌：离心去除细胞碎片，取上清液检测。

　　稀释要求‌：建议用样本稀释液将样本稀释10倍后进行检测。

　　五、实验步骤

　　准备试剂‌：所有试剂平衡至室温(25±2℃)，浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍。

　　加样‌：

　　标准品孔：加入100μL系列稀释的标准品(浓度范围：0-2000pg/mL)。

　　样本孔：加入100μL稀释后的样本。

　　空白孔：不加任何试剂。

　　孵育‌：37℃孵育90分钟，弃去孔内液体。

　　洗涤‌：每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。

　　加酶标记物‌：每孔加入100μL，37℃孵育60分钟。

　　洗涤‌：同步骤4。

　　显色‌：每孔加入90μL TMB显色液，37℃避光孵育15-20分钟。

　　终止反应‌：每孔加入50μL终止液，蓝色立即转为黄色。

　　读数‌：30分钟内用酶标仪测定450nm吸光度值。

　　六、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线。

　　根据样本OD值在标准曲线上查出对应浓度，乘以稀释倍数即为样本实际浓度。

　　七、注意事项

　　试剂保存‌：未使用微孔板需密封干燥保存，避免受潮。

　　操作规范‌：

　　加样时避免产生气泡，枪头尖端不接触孔壁。

　　洗涤需彻底，拍干时避免过度用力。

　　显色反应时间需严格控制，避免过度显色。

　　质量控制‌：

　　标准曲线相关系数(R²)应≥0.95。

　　板内/板间变异系数(CV)应<10%。

　　异常处理‌：

　　高背景：检查洗涤是否充分，避免酶标记物污染。

　　显色弱：确认试剂是否过期，孵育时间是否足够。

　　八、性能指标

　　灵敏度‌：检测下限≤5pg/mL。

　　回收率‌：85%-115%(血清样本验证)。

　　特异性‌：与小鼠TLR-1/2/4/6/7无交叉反应。

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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