人基质金属蛋白酶11(MMP11)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　人基质金属蛋白酶11(MMP11)ELISA试剂盒实验使用说明书‌

　　BS-0311人基质金属蛋白酶11(MMP11)ELISA试剂盒

　　一、产品概述

　　本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，用于定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的MMP11蛋白浓度。‌ 适用于科研实验，不用于临床诊断。

　　二、试剂盒组成

　　组分 数量 规格

　　预包被抗人MMP11抗体板 1块 96孔

　　标准品(冻干) 2支 各1mL

　　生物素标记检测抗体 1瓶 12mL

　　辣根过氧化物酶标记链霉亲和素 1瓶 12mL

　　标准品稀释液 1瓶 20mL

　　样品稀释液 1瓶 20mL

　　洗涤缓冲液(20×) 1瓶 30mL

　　底物A液(TMB) 1瓶 6mL

　　底物B液(H₂O₂) 1瓶 6mL

　　终止液(2M H₂SO₄) 1瓶 6mL

　　封板膜 2张 96孔

　　三、实验前准备

　　试剂复温‌：将所有试剂平衡至室温(25±2℃)至少30分钟，避免直接加热。‌

　　洗涤液配制‌：将20×洗涤缓冲液用去离子水稀释至1×(如30mL浓缩液+570mL水)。

　　标准品稀释‌：

　　加入1mL标准品稀释液至冻干标准品管中，静置10分钟，轻柔混匀。

　　按下表稀释，配制0-1500pg/mL系列标准品(示例浓度，具体以实际说明书为准)：

　　管号 标准品体积(μL) 稀释液体积(μL) 浓度(pg/mL)

　　1 1000 0 1500

　　2 500 500 750

　　... ... ... ...

　　6 0 1000 0

　　四、实验步骤

　　加样‌：

　　设置空白孔(只加样本稀释液)、标准孔、样本孔。

　　每孔加入100μL标准品或样本(建议复孔检测)。

　　样本处理方法：血清/血浆需离心后取上清;细胞上清可直接检测。‌

　　孵育‌：

　　37℃孵育90分钟。

　　洗板5次，每次拍干。

　　加检测抗体‌：

　　每孔加入100μL生物素标记抗体，37℃孵育60分钟。

　　洗板5次。

　　加酶标试剂‌：

　　每孔加入100μL酶标试剂，37℃避光孵育30分钟。

　　洗板5次。

　　显色‌：

　　每孔加入90μL底物A液+90μL底物B液，37℃避光孵育15分钟。

　　终止反应‌：

　　每孔加入50μL终止液，颜色由蓝变黄。

　　读数‌：

　　立即用酶标仪在450nm波长测OD值。

　　五、结果计算

　　标准曲线绘制‌：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，拟合四参数逻辑曲线。

　　样本浓度计算‌：根据样本OD值从标准曲线中反推浓度，乘以稀释倍数(如有)。

　　六、注意事项

　　样本处理‌：

　　避免反复冻融样本，建议分装保存。

　　溶血、高脂或浑浊样本需离心或过滤后检测。‌

　　操作规范‌：

　　加样时避免气泡，移液器吸头需贴壁加样。

　　洗涤需彻底，残留洗涤液影响结果。

　　试剂保存‌：

　　未使用板条密封后2-8℃保存，标准品分装后-20℃保存。

　　底物液避光保存，避免污染。

　　安全防护‌：

　　终止液含强酸，操作时佩戴手套和护目镜。

　　七、性能参数

　　灵敏度‌：≤5pg/mL(具体以实测为准)。

　　检测范围‌：15.6-1000pg/mL(示例值)。

　　精密度‌：板内变异系数<10%，板间<15%。

　　回收率‌：85%-115%(spike实验验证)。

　　八、常见问题解答

　　OD值低‌：检查试剂是否过期、孵育时间是否不足。

　　标准曲线不佳‌：确保标准品稀释准确，洗板步骤规范。

　　样本值超出范围‌：稀释样本后重新检测。

　　注‌：本说明书为通用模板，具体操作请以实际试剂盒附带说明书为准。

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。