鸡白介素9(IL-9)ELISA试剂盒实验使用说明书

鸡白介素9（IL-9）ELISA试剂盒实验使用说明书

BS-4272

鸡白介素9(IL-9)ELISA试剂盒

一、产品概述

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术，用于定量检测鸡血清、血浆或细胞培养上清液中的白介素9（IL-9）浓度。‌ 主要组成包括：

预包被抗鸡IL-9单抗的96孔板

生物素标记的抗鸡IL-9检测抗体

辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（HRP-Streptavidin）

标准品（重组鸡IL-9蛋白）

样本稀释液、洗涤液、显色底物等

二、实验原理

通过双抗体夹心法检测样本中的IL-9：

样本中的IL-9与预包被抗体结合‌

生物素标记的检测抗体与IL-9结合形成夹心复合物

加入HRP标记的链霉亲和素催化显色反应

通过450nm波长测定吸光度，浓度与吸光度呈正相关‌

三、样本处理

血清/血浆‌：采集后室温静置30分钟，4℃离心（3000×g，15分钟）取上清，-20℃保存。避免反复冻融。‌

细胞上清‌：离心去除细胞碎片，立即检测或分装保存。

稀释要求‌：若样本浓度超过检测范围，建议用样本稀释液稀释后重新检测。‌

四、操作步骤

1. 试剂准备

所有试剂使用前平衡至室温（20-25℃）

洗涤液：用双蒸水稀释浓缩液至1×工作浓度

2. 加样与孵育

每孔加入100μL标准品/样本（建议设复孔）

37℃孵育90分钟

洗板3次，拍干残留液体

3. 检测抗体反应

每孔加入100μL生物素标记抗体

37℃孵育60分钟

洗板3次

4. 酶结合物反应

每孔加入100μL HRP标记物

37℃避光孵育30分钟

洗板5次

5. 显色与终止

每孔加入90μL底物溶液，37℃避光孵育15分钟

加入50μL终止液终止反应

6. 读数

立即用酶标仪在450nm波长测定吸光度（建议双波长校正：630nm）。‌

五、结果计算

以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

根据样本吸光度值，通过标准曲线计算实际浓度。‌

若样本经稀释，结果需乘以稀释倍数。

六、注意事项

避免使用溶血或脂血样本，可能影响检测准确性。‌

洗板需彻底，残留液体可能导致假阳性。

显色液应避光保存，避免直接接触金属离子。

不同批号试剂不可混用。

终止液含硫酸，操作时需佩戴防护装备。

七、性能指标

灵敏度：≤5 pg/mL

检测范围：15.6-1000 pg/mL

精密度：板内变异系数<10%，板间变异系数<15%‌

八、储存条件

未开封试剂盒：2-8℃保存，有效期6个月。

开封后标准品：建议分装冻存，避免反复冻融。

显色底物：4℃避光保存，2周内使用完毕。‌

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