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技术资料/正文
64 人阅读发布时间:2025-11-17 10:13
鸡转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒实验使用说明书
BS-4275鸡转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒
一、实验目的
本试剂盒用于体外定量检测鸡血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中转化生长因子β1(TGF-β1)的含量,适用于科研实验用途。
二、实验原理
采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。预先包被鸡TGF-β1捕获抗体的微孔板中,依次加入样本、标准品及HRP标记的检测抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经彻底洗涤后,加入TMB显色底物,在HRP酶催化下显蓝色,酸性终止后变黄色。颜色深浅与样本中TGF-β1浓度呈正相关,通过酶标仪测定450nm波长吸光度(OD值),计算样本浓度^^1^^。
三、试剂盒组成
核心组分:预包被微孔板、标准品、HRP标记检测抗体、显色底物A/B液、终止液、浓缩洗涤液。
辅助材料:样本稀释液、封板膜、说明书。
四、样本处理
血清/血浆:室温静置10-20分钟,2000-3000转/分离心20分钟,收集上清。避免反复冻融,长期保存需分装于-20℃或-80℃。
组织匀浆:用PBS匀浆后离心取上清,细胞培养上清需1000×g离心20分钟去除杂质。
活化处理:生物样本中TGF-β1常以无活性形式存在,检测前需用活化试剂1和2按比例处理室温孵育。
五、实验步骤
准备阶段:提前20分钟将试剂盒平衡至室温,浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:24)。
加样:每孔加入标准品或样本,37℃温育1小时。
洗涤:用洗涤液洗涤4-5次,拍干残留液体。
显色:加入HRP标记抗体及TMB底物,37℃避光显色15-20分钟。
终止与测定:加入终止液终止反应,450nm波长测定OD值。
六、注意事项
样本保存:短期检测可4℃保存,长期需分装冻存于-20℃或-80℃,避免反复冻融。
实验环境:避免强光或剧烈震动,防止交叉污染。
安全操作:终止液含酸性物质,需佩戴防护装备。
七、结果计算
根据标准品浓度与OD值绘制标准曲线,通过样本OD值计算TGF-β1浓度。若样本浓度高于标准品上限,需稀释后复测。
注:本试剂盒仅供科研使用,不用于临床诊断。具体操作请以实际试剂盒说明书为准。
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