鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-4266鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA)ELISA试剂盒

　　一、产品概述

　　本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测鸡血清、血浆或分泌物中的SIgA浓度，适用于禽类免疫监测、疾病诊断及疫苗效果评估‌。试剂盒包含预包被抗鸡SIgA单抗的96孔微孔板、标准品、酶标二抗、显色底物等核心组分。

　　二、实验原理

　　通过特异性抗体捕获样本中的SIgA，形成抗原-抗体复合物，再通过酶标二抗结合显色，显色强度与SIgA浓度呈正相关，于450nm波长测定吸光度值，通过标准曲线计算样本浓度‌。

　　三、试剂盒组成

　　微孔板‌：12×8孔，预包被抗鸡SIgA单抗

　　标准品‌：6个浓度梯度(0-1000ng/mL)，冻干粉需复溶

　　酶标二抗‌：辣根过氧化物酶标记的抗鸡SIgA抗体

　　显色底物‌：TMB溶液

　　终止液‌：2M硫酸

　　洗涤缓冲液‌：20×浓缩液，需稀释使用

　　样本稀释液‌：含0.1% BSA的PBS缓冲液

　　封板膜‌：自粘型，用于孵育过程密封

　　四、样本要求

　　血清/血浆‌：采集后室温静置30分钟，3000rpm离心10分钟，取上清液。避免溶血，-20℃保存≤1周，-80℃长期保存(避免反复冻融)‌。

　　分泌物‌：如眼鼻分泌物，需用生理盐水稀释后检测，离心取上清。

　　稀释比例‌：建议血清/血浆按1:100稀释，分泌物按1:10稀释，具体比例需预实验优化。

　　五、实验步骤

　　1. 试剂准备

　　洗涤缓冲液：将20×浓缩液用去离子水稀释至1×(如20mL浓缩液+380mL水)‌。

　　标准品复溶：每管加入1mL样本稀释液，静置15分钟，涡旋混匀。

　　2. 加样与孵育

　　设空白孔、标准孔、样本孔，每孔加入100μL标准品或稀释样本。

　　37℃孵育90分钟，弃去孔内液体，拍干。

　　3. 洗涤

　　每孔加入350μL洗涤缓冲液，静置1分钟，弃去液体，重复5次，拍干。

　　4. 酶标二抗反应

　　每孔加入100μL酶标二抗，37℃孵育60分钟。

　　重复洗涤步骤。

　　5. 显色与终止

　　每孔加入90μL显色底物，避光室温显色15-20分钟。

　　每孔加入50μL终止液，终止反应。

　　6. 测定

　　30分钟内用酶标仪测定450nm波长吸光度(参考波长630nm校正)。

　　六、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。

　　根据样本OD值，通过标准曲线或拟合方程计算SIgA浓度(ng/mL)。

　　若样本OD值超出标准曲线范围，需调整稀释比例重新测定。

　　七、注意事项

　　试剂保存‌：未开封试剂盒2-8℃保存，有效期见标签;开封后微孔板需干燥剂密封，其余组分按说明书分装保存。

　　样本处理‌：避免使用溶血、脂血或反复冻融样本，分泌物样本需离心去除杂质。

　　操作规范‌：加样时避免产生气泡，洗涤需彻底，显色时间严格控制。

　　安全防护‌：终止液含强酸，操作时佩戴手套和护目镜。

　　八、性能指标

　　灵敏度‌：最低检测限≤1.56ng/mL。

　　精密度‌：板内/板间变异系数均<10%。

　　回收率‌：85%-115%。

　　特异性‌：与鸡IgM、IgG无交叉反应。

　　九、常见问题解答

　　Q‌：样本OD值过高或过低?

　　A‌：调整稀释比例，或检查样本是否溶血/污染。

　　Q‌：标准曲线线性不佳?

　　A‌：复溶标准品时需充分混匀，避免气泡影响加样精度。

　　注：以上仅供参考，本试剂仅供科研使用，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

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