大鼠蛋白激酶G-II型(PKG-II)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　大鼠蛋白激酶G-II型(PKG-II)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　BS-8581 大鼠蛋白激酶G-II型(PKG-II)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)技术。将纯化的大鼠PKG-II捕获抗体包被于微孔板，形成固相抗体，依次加入样本、PKG-II及HRP标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。洗涤后加底物TMB显色，颜色深浅与样本中PKG-II浓度呈正相关，通过酶标仪测定吸光度值计算含量。

　　二、试剂盒组成

　　组分48孔配置96孔配置保存条件

　　酶标包被板1×48孔1×96孔2-8℃密封保存

　　标准品0.3ml×6管0.3ml×6管2-8℃保存

　　酶标试剂5ml10ml2-8℃避光保存

　　显色剂A/B液各3ml各6ml2-8℃避光保存

　　终止液3ml6ml室温保存

　　20×浓缩洗涤液15ml25ml室温保存

　　说明书/封板膜/密封袋各1份/2片/1个各1份/2片/1个-

　　三、样本处理

　　血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心2000-3000转/分20分钟，取上清。若出现沉淀需再次离心。

　　血浆：使用EDTA或柠檬酸钠抗凝，混合10-20分钟后离心，取上清。沉淀需再次离心。

　　组织匀浆：按组织质量加入生理盐水(如1g组织加9ml)，匀浆后离心取上清。

　　细胞培养上清：无菌管收集，离心取上清。

　　四、操作步骤

　　加样：设空白孔、标准孔、待测样本孔。每孔加入标准品或样本100μl，37℃孵育90分钟。

　　洗涤：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置1分钟后甩干，重复5次。

　　加酶标试剂：每孔加入酶标试剂100μl(空白孔除外)，37℃孵育60分钟。

　　显色：每孔加入显色剂A液50μl、B液50μl，37℃避光孵育15分钟。

　　终止：每孔加入终止液50μl，终止反应(蓝色变黄色)。

　　测定：以空白孔调零，450nm波长测定各孔吸光度值。

　　五、注意事项

　　试剂保存：标准品需分装冻存，避免反复冻融;显色剂B液需严格避光。

　　操作规范：

　　使用一次性吸头避免交叉污染。

　　加样顺序一致，确保温育时间相同。

　　洗涤时拍干酶标板，避免吸水纸直接接触孔内液体。

　　安全防护：

　　避免直接接触终止液和显色剂，如接触需立即用水冲洗。

　　实验过程中禁止饮食、吸烟或使用化妆品。

　　六、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标(X)，吸光度值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。根据样本吸光度值，在标准曲线上对应确定PKG-II浓度。

　　七、常见问题处理

　　显色过浅：检查酶标试剂是否失效或温育时间不足。

　　显色不均：确保洗涤充分，避免气泡干扰。

　　标准曲线线性差：重新配制标准品，避免稀释误差。

　　八、有效期

　　试剂盒在2-8℃下

　　注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。 Elisa试剂盒

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